tris和磷酸鹽都是很常用的緩沖液,它們有相同的地方也有很多不同的地方,如何能在使用時(shí)正確分辨和選擇,這也是難倒了一批人。我們今天就先從它們各自的應(yīng)用及使用環(huán)境講起。讓你能很直觀的感受到它們的區(qū)別。
tris緩沖液
在電泳緩沖液中同*構(gòu)成緩沖體系穩(wěn)定ph值;在凝膠中使用tris-hcl緩沖體系穩(wěn)定ph值;被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑;tris緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)還可用于線蟲(chóng)的中間纖維的形成;在tris鹽酸緩沖液中加入edta制成“te緩沖液”,可用于dna的穩(wěn)定和存儲(chǔ);將調(diào)節(jié)ph值的酸溶液換成乙酸,獲得“tae緩沖液”,換成硼酸可獲得tbe緩沖液。這兩種緩沖液常用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)中。
磷酸鹽緩沖液
一般的有活性的生物制劑都要用磷酸鹽緩沖溶液來(lái)稀釋。原因就是它具有鹽平衡、可調(diào)整適宜ph值的緩沖作用。蒸餾水不具有鹽平衡作用,會(huì)破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性;生理鹽水不具有調(diào)整ph的作用,對(duì)完整的、有活性的物質(zhì)不能保證其在合適條件下參與生物反應(yīng),所以使用pbs是先選。當(dāng)然,有的生物活性物質(zhì)需要的條件比較高,就需要在平衡緩沖液中加入更多的成分,維持合適的條件保證生物活性物質(zhì)保持其最完整的特性。因此pbs主要用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),其緩沖范圍合適宜在中性(7.0)。
在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中要慎重地選擇緩沖溶液,不僅要考慮緩沖液的緩沖范圍,還要綜合考慮緩沖液的使用環(huán)境:
1. 磷酸鹽緩沖溶液的緩沖范圍比較寬,但是它在ph7.5以上時(shí)緩沖能力很??;tris本身呈堿性,可以只用tris-hcl緩沖體系即可配制ph范圍由酸性到堿性的緩沖液,方法也較為簡(jiǎn)單,對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn),tris還可以與其他物質(zhì)組成多種緩沖體系。
2. 磷酸鹽緩沖溶液易與常見(jiàn)的ca2+離子、mg2+離子以及重金屬離子締合生成沉淀,同時(shí)會(huì)抑制某些生物化學(xué)過(guò)程以及多數(shù)酶的活性,包括激酶,磷酸化酶,脫氫酶等;相比之下tris緩沖溶液對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,也不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。若反應(yīng)體系中存在金屬離子或者酶制劑,則以tris緩沖溶液為較優(yōu)選擇。
3. tris緩沖液的ph值受溶液濃度影響較磷酸鹽緩沖溶液大,同樣稀釋十倍,磷酸鹽緩沖溶液的ph值變化小于0.1,而tris緩沖液的ph值變化則大于0.1。因此對(duì)于體積變化較大的反應(yīng)體系,則應(yīng)慎重使用tris 緩沖液。
4. 另外,tris緩沖溶液受環(huán)境影響較大。一般來(lái)說(shuō),溫度每升高一度,ph值下降0.03; 同時(shí)其易吸收空氣中的co2,所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封。