a. 預(yù)制凝膠法
1. 將gelred(10,000x)原液以1:10,000比例加入到熔化的凝膠中,混合均勻。(gelred可在加熱后的凝膠冷卻至45℃左右時(shí)添加。)
2. 倒膠,室溫放置等待凝固。
3. 按常規(guī)方法上樣電泳。
4. 觀(guān)察染色凝膠使用標(biāo)準(zhǔn)的透照儀(302或312 nm),成像使用溴化乙錠濾光器,sybr或gelstar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。
5. 未使用的含有g(shù)elred的預(yù)制凝膠可以重新熔化做膠,為保證最佳熒光信號(hào),酌情添加適量染料。不建議長(zhǎng)期儲(chǔ)存含有g(shù)elred熔化形式的瓊脂糖。含有g(shù)elred的預(yù)制膠可以保存在4℃供下次使用
b. 泡染法
1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行凝膠電泳。
2. 稀釋 gelred :用水將10,000x儲(chǔ)備液稀釋3300倍制成3x染色液。通常情況下50ml染色液足夠染一小塊凝膠。(注:染色液中含有0.1 m nacl能增強(qiáng)靈敏度,但可能會(huì)促使凝膠染色出現(xiàn)沉淀。)
3. 把凝膠放于合適的容器,如聚丙烯染色托盤(pán)中。添加足量的3x染色液至浸沒(méi)凝膠。
4. 室溫緩慢振蕩染色30min。注:最佳染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同略有不同。對(duì)于含3.5-10%丙烯酰胺的凝膠,染色時(shí)間通常介于30min至1h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長(zhǎng)。
5. 不必脫色,必要的話(huà)可以水洗以降低背景值。
6. 使用標(biāo)準(zhǔn)的透照儀(302或312 nm)觀(guān)察染色凝膠,成像使用溴化乙錠濾光器,sybr 或 gelstar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。