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AtT-20小鼠垂體瘤細(xì)胞培養(yǎng)步驟

發(fā)布時(shí)間:2024-04-24
att-20小鼠垂體瘤細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5ml培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6ml*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的pbs潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%trypsin-0.53mm edta)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,*脫落后吸出,在1000rpm條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
2、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000rpm條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法三:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
1)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰mei,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000rpm條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入到凍存液中。
關(guān)鍵詞:培養(yǎng)箱 顯微鏡
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