二、進行組織培養(yǎng)前的準備：
1.培養(yǎng)容器和玻璃儀器的準備：
進行培養(yǎng)基的配制首先要準備好培養(yǎng)瓶和配制使用的玻璃儀器。培養(yǎng)瓶一般使用各種果醬瓶，要先用洗潔精浸泡瓶子4~8小時，再用流水沖洗數(shù)次。其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔，直到玻璃壁上不掛水珠而是成為水膜為止。清洗完畢的玻璃容器要倒扣，空去瓶內(nèi)的水。
清洗干凈的容器要注意防塵，盡量放置在玻璃柜中。更簡單的是用干凈的毛巾將容器蓋住。
移液管要用吸球來清洗，反復用蒸餾水吹吸直到潔凈為止，將移液管放置在一個長筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要準備幾只移液管，建議：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培養(yǎng)基的配制：
經(jīng)典的組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基是ms配方，其基本上劃分為：大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、植物激素、糖和支持物。這些成分的用量都在毫克級，用普通天平是難以稱量的，為了解決這個問題，我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的時候按一定比例加入即可。
下面我將一種ms培養(yǎng)基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸銨66.0克；
硝酸鉀76.0克；
無水氯化鈣13.3克；
七水硫酸鎂14.8克；
磷酸二氫鉀6.8克。
以上分別溶解后合并定容到1升，每配制1升標準ms培養(yǎng)基取25毫升。
鐵鹽：七水硫酸亞鐵5.56克；
乙二胺四乙酸二鈉（edtana）7.46克。
以上兩種分別加熱溶解，混合，定容到1升，調(diào)整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有機復合物的用量過于微小，為了簡便我們可以用蔬菜提取液或者馬鈴薯提取液代替。通常我們習慣用100克菠菜加100ml的水煮沸10分鐘，過濾留濾液，每配制1升ms培養(yǎng)基加入20~50毫升提取液。同樣也可以使用帶皮馬鈴薯100克加200毫升水煮沸15分鐘，過濾留濾液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各組分后，每升ms培養(yǎng)基還需要加入白砂糖30克，瓊脂7克。這里要說明的是，糖和瓊脂都是可變的量，要根據(jù)需要調(diào)整。另外制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波爐加熱，直到瓊脂全部溶解為止。此時加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，這樣每取1毫升，換算到培養(yǎng)基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是為了抵消分裝和消毒中的損耗。最后用酸堿調(diào)整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培養(yǎng)基：
目前國內(nèi)的一些化學品公司開發(fā)了簡便的ms培養(yǎng)基原粉，大大簡便了培養(yǎng)基的配制，根據(jù)不同公司的說明選擇培養(yǎng)基的種類。下面就以泛生化學品公司的ms原粉為例：泛生化學品公司生產(chǎn)的ms培養(yǎng)基原粉，包括了大量元素、微量元素、鐵鹽、有機復合物、糖和支持物，他們的支持物是一種人工合成的半乳糖硫酸脂——polygal，這種物質(zhì)作為支持物雖然提高了成本，但是無論是透明度還是強度都優(yōu)于瓊脂，更重要的是ploygal對組織的褐變有一定的抑制作用，對初學者尤為重要。一般稱取ms原粉40克，加水800毫升，微波爐加熱溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），調(diào)整ph值到5.8~6.0。
值得指出的是polygal還有一個特點，他對ph和滅菌時間的敏感性很強，如果培養(yǎng)基配制和滅菌出現(xiàn)問題，他會變色來提醒實驗者培養(yǎng)基出現(xiàn)問題，這個也對初學者有一定的幫助。泛生公司也提供純品polygal供研究使用。
泛生公司的ms原粉價格大約是50元1000克，能制備20升ms培養(yǎng)基。這對于家庭做組培的愛好者來說，花50元錢可以使用一兩年。
4.分裝：
將配制好的培養(yǎng)基分裝在培養(yǎng)容器中，注意要趁熱分裝，因為瓊脂在40度以下就會凝固。每個培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)基大約是瓶容積的1/6~1/5，注意不要將培養(yǎng)基掛在瓶的外壁，這樣容易造成污染。分裝后用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口，用膠圈固定（膠圈盡量選擇自行車的內(nèi)胎，這種膠圈比較耐熱）。
5.滅菌：
采用家庭壓力鍋消毒，建議到醫(yī)療器械用品商店買一些“滅菌效果試紙”，它們可以指示滅菌效果，當滅菌達到效果時會變色。把試紙和培養(yǎng)基同時放入鍋內(nèi)，加熱到有大量蒸汽冒出，再加上壓力伐，維持小火30~40分鐘。
滅菌完畢后自然冷卻，將培養(yǎng)基取出，放在陰涼無塵處備用。
6.接種箱的準備：
新作的接種箱必須要清潔干凈，盡量做到無死角。每次使用前2小時，將操作所需要的全部物品放入接種箱，再用一個小燒杯加入3~5克高錳酸鉀放入接種箱內(nèi)，在箱內(nèi)向燒杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大約幾秒鐘后會看到甲醛蒸汽出現(xiàn)，這樣可以對接種箱內(nèi)的所有物品進行初次消毒；同時打開紫外線燈照射。紫外線燈是高電壓穿激汞蒸汽產(chǎn)生的，紫外線進行第二道滅菌，在紫外線照射大約15分鐘后，會激發(fā)氧氣形成臭氧，臭氧作為第三道滅菌防線，這樣經(jīng)過三次滅菌，接種箱基本上可以達到無菌標準。
在操作前15分鐘內(nèi)，向剛才蒸發(fā)甲醛用的燒杯中倒入5毫升濃氨水，因為甲醛對人體有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一種叫做“六亞甲基四胺”的固體物質(zhì)，從而中和了甲醛的刺激性蒸汽。這個時候紫外燈不要關(guān)掉，要繼續(xù)照射，直到操作前5分鐘關(guān)閉，維持黑暗5分鐘，然后再打開日光燈進行操作。維持5分鐘黑暗的原因是，紫外光對微生物的殺滅是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚體，但是微生物具有一種光復活蛋白，可以在有可見光的環(huán)境下還原胸腺四聚體，而使微生物復活，這個作用叫做“光復活作用”，所以在關(guān)掉紫外燈后必須維持黑暗幾分鐘，避免光復活作用的出現(xiàn)。