腐皮鐮刀菌是蘋(píng)果重茬連作障礙（adr）的主要致病菌，嚴(yán)重?fù)p害蘋(píng)果根系，抑制蘋(píng)果植株正常生長(zhǎng)。然而，蘋(píng)果抵御腐皮鐮刀菌的分子機(jī)制尚不清楚。因此，本研究對(duì)蘋(píng)果和腐皮鐮刀菌之間的相互作用機(jī)制進(jìn)行了探究。
2023年1月31日，西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院蘋(píng)果重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的最新研究成果，發(fā)表在plant physiology期刊上(影響因子8.005)，文章題目為“mderf114 enhances the resistance of apple roots to fusarium solani by regulating the transcription of mdprx63”。該研究使用dna親和純化測(cè)序(dap-seq)技術(shù)鑒定了蘋(píng)果mderf114的結(jié)合基序和靶基因。進(jìn)一步研究揭示了mderf114正向調(diào)控蘋(píng)果根系抵御腐皮鐮刀菌侵染的分子機(jī)制，為培育抗adr的砧木提供了寶貴的基因資源。
mderf114在蘋(píng)果根系中受腐皮鐮刀菌誘導(dǎo)表達(dá)水平升高，mderf114定位于細(xì)胞核中。過(guò)表達(dá)mderf114提高了蘋(píng)果根系對(duì)腐皮鐮刀菌的耐受性；而干擾mderf114的表達(dá)，根系對(duì)腐皮鐮刀菌敏感。通過(guò)dap-seq技術(shù)鑒定了mderf114結(jié)合的順式作用元件gcc-box (gccgcc)，并篩選到一個(gè)與木質(zhì)素合成相關(guān)的靶基因mdprx63。隨后，酵母單雜交(y1h)、電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(emsa)、雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和β-葡萄糖醛酸酶(gus)染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了mderf114可以直接與mdprx63啟動(dòng)子區(qū)域的gcc-box結(jié)合。
圖1. mderf114直接與mdprx63啟動(dòng)子結(jié)合
a. dap-seq鑒定了mderf114的結(jié)合元件gcc-box。b. mdprx63啟動(dòng)子序列分析顯示了gcc-box結(jié)合元件的存在。c. y1h實(shí)驗(yàn)表明mderf114可以與mdprx63啟動(dòng)子結(jié)合。d. emsa實(shí)驗(yàn)表明mderf114與mdprx63啟動(dòng)子中的gcc-box結(jié)合。e. 在本氏煙草中共表達(dá)mderf114和promdprx63影響luc/ren的相對(duì)活性。f. gus染色結(jié)果表明mderf114可以激活promdprx63的表達(dá)。
mderf114通過(guò)與mdprx63啟動(dòng)子結(jié)合調(diào)控其轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)蘋(píng)果根系中木質(zhì)素的沉積，從而提高對(duì)腐皮鐮刀菌的抗性。mdwrky75同樣受腐皮鐮刀菌誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào)，mdwrky75與mderf114啟動(dòng)子區(qū)域的w-box元件結(jié)合調(diào)控mderf114的表達(dá)，從而獲得對(duì)腐皮鐮刀菌的抗性。此外，mdmyb8通過(guò)與mderf114相互作用，促進(jìn)mderf114與mdprx63啟動(dòng)子的結(jié)合，參與mderf114介導(dǎo)的對(duì)腐皮鐮刀菌的防御網(wǎng)絡(luò)。
圖2. mdwrky75-mderf114-mdmyb8-mdprx63模塊在蘋(píng)果抵御腐皮鐮刀菌侵染中的作用
腐皮鐮刀菌誘導(dǎo)了mdwrky75的表達(dá)，mdwrky75可直接與mderf114啟動(dòng)子中的w-box基序結(jié)合。mderf114直接與mdprx63啟動(dòng)子的gcc-box基序結(jié)合，并激活其表達(dá)，導(dǎo)致木質(zhì)素沉積。mdmyb8的表達(dá)也由腐皮鐮刀菌誘導(dǎo)。mdmyb8和mderf114之間的相互作用增強(qiáng)了mderf114與mdprx63啟動(dòng)子的結(jié)合。木質(zhì)素的沉積增強(qiáng)了蘋(píng)果根系對(duì)腐皮鐮刀菌的抗性。
小結(jié)：該研究為蘋(píng)果根系抵御腐皮鐮刀菌侵染的調(diào)控機(jī)制提供了新的見(jiàn)解。同時(shí)，也為利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的根系轉(zhuǎn)基因技術(shù)，培育抗性砧木和防治蘋(píng)果重茬連作障礙提供了新的策略。
藍(lán)景科信提供了dap-seq技術(shù)支持。