超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器,在物理化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)、化工冶金等生產(chǎn)管理部門都有廣泛而且重要的應(yīng)用。超微量分光光度計已成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器,常用于核酸、蛋白定量及細菌生長濃度等的定量。
儀器結(jié)構(gòu):
1、光源(鎢燈、鹵鎢燈,氫弧燈,氘燈、氙燈或激光光源)。
2、單色器(濾光片、棱鏡、光柵、全息柵)。
3、樣品吸收池。
4、檢測系統(tǒng)(光電池、光電管、光電倍增管)。
5、信號指示系統(tǒng)(檢流計、微安表、數(shù)字電壓表、示波器、微處理機顯像管),光源-單色器-樣品吸收池-檢測系統(tǒng)-信號指示系統(tǒng)。
性能特點:
1、所需樣品體積小,僅需1~2μl。
2、不需要比色皿,用移液槍將樣品滴加到檢測平臺上,測量時自動形成液柱。
3、檢測完成后只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可。
4、有1mm和0.2mm兩個光程(電機控制自動選擇光程),樣品無需稀釋,測量范圍可達常規(guī)分光光度計的50倍。
5、氙氣閃光燈為燈源,壽命長,性能穩(wěn)定
6、不需要預(yù)熱,可隨時檢測
7、顯示吸光度值的同時,程序直接給出濃度值(核酸、蛋白和熒光染料)
8、體積較小,攜帶方便。
應(yīng)用領(lǐng)域:
1、核酸的定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率較高的功能。其可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈dna、雙鏈dna,以及rna。核酸的z高吸收峰的吸收波長為260nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)消光因子。
2、uv-vis常規(guī)可見-紫外檢測
全波長超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能。
3、蛋白質(zhì)的直接定量(uv法)
這種方法是在280nm波長直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如dna干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
4、比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸如*、*等與外加的顯色基團或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
5、細菌細胞密度測定
實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要采用分光光度計準(zhǔn)確測定細菌細胞密度。