mrna原液中采用hepes作為buffer可能與前一步rna聚合酶體外轉錄密切相關。
早在1987年便有研究報道使用hepes緩沖對用于體外轉錄,在該研究中考察了不同反應條件下ihnv(感染性造血壞死病毒)的 rna 聚合酶的體外轉錄,研究結果表明對比tris,使用hepes緩沖液可以最大限度地提高體外轉錄(ivt)效率。
研究中對緩沖條件的研究表明,hepes緩沖液刺激的rna合成量比tris緩沖液高三倍(圖1 a),最佳濃度的hepes緩沖液為400mm。
英國帝國理工大學醫(yī)學院傳染病系系主任robin shattock是mrna預防性疫苗領域的專家,與biontech以及pni等公司都有較為密切的合作。其團隊2021年發(fā)表關于sarna體外轉錄體系優(yōu)化的文章中,考察篩選了影響sarna體外轉錄的關鍵影響因素,最終確定了采用40mm濃度的hepes作為ivt反應體系buffer,具有更優(yōu)的體外轉錄效果。
2016年biontech發(fā)表lpx-mrna制劑的文章中mrna原液中所采用的buffer為hepes。該研究中使用hepes緩沖液配置1mg/ml的rna原液,用于進一步制備rna-lpx。
hepes作為ivt反應體系buffer具有優(yōu)勢,這是我們結合相關文獻,推斷biontech采用hepes緩沖對作為mrna原液buffer的原因。
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