血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等,其間蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種,是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分,其間有些氨基酸動(dòng)物細(xì)胞自身不能合成,必定要由培養(yǎng)液提供。
血清激素有胰島素、成長激素等及多種成長因子(如表皮成長因子、成纖維細(xì)胞成長因子、類胰島素成長因子等)血清還含有多種不知道的促細(xì)胞成長因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì),能促進(jìn)細(xì)胞的成長、增殖和貼附。
因而,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),要確保細(xì)胞能夠順暢成長和增殖,一般需增加百分之十到百分之二十的血清,動(dòng)物血清還可起到酸堿度緩沖液的效果。
怎么凍結(jié)血清才不會(huì)使它的質(zhì)量受損呢?
首先將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8c冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必定要注意的是,溶解進(jìn)程中必定要規(guī)矩地?fù)u晃均勻以防止沉淀物的產(chǎn)生!小編下面就來具體介紹下辦法和過程:
防止產(chǎn)生沉淀物的辦法:
1、凍結(jié)血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
2、凍結(jié)血清時(shí),請(qǐng)依照所建議的逐步凍結(jié)法(-2℃至4℃至室溫),若血清凍結(jié)時(shí)改動(dòng)的溫度太大(如-20℃至37℃),試驗(yàn)顯現(xiàn)非常簡單產(chǎn)生沉淀物。
3、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因而受到危害,而影響血清的質(zhì)量。
4、血清的熱滅活非常簡單形成沉淀物的增多,若非必要,能夠無須做此過程。
5、若必定要做血清的熱滅活,請(qǐng)恪守56℃,30分鐘的準(zhǔn)則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)形成沉淀物的增多。
血清凍結(jié)后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物呈現(xiàn),該怎么處理?欲去除這些絮狀沉淀物,能夠?qū)⒀宸盅b至無菌離心管內(nèi),以400g略微離心,上清液即可接著參加培養(yǎng)基內(nèi)一同過濾。但不建議以過濾的辦法去除這些絮狀沉淀物,由于它可能會(huì)阻塞過濾膜。