摘要:綜述了乳制品中***殘留現(xiàn)狀和危害,以及各種***殘留的檢測(cè)方法,為加強(qiáng)我國(guó)乳制品中的***監(jiān)測(cè),解決目前乳品工業(yè)發(fā)展中面臨的難題提供參考。
關(guān)鍵詞:乳制品;***殘留;
檢測(cè)方法
乳及乳制品是老少皆宜的營(yíng)養(yǎng)品,在我國(guó),乳制品及乳制品工業(yè)發(fā)展迅速,同時(shí)畜牧業(yè)也發(fā)展迅猛,β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)等***在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中廣泛應(yīng)用,造成乳及乳制品中***殘留,給消費(fèi)者健康帶來(lái)了潛在威脅,因而提高***殘留的檢測(cè)技術(shù)顯得尤其重要,盡快開(kāi)發(fā)或引進(jìn)*的***檢測(cè)技術(shù)以解決我國(guó)當(dāng)前乳和乳制品行業(yè)面臨的難題已成為當(dāng)務(wù)之急。
1***殘留現(xiàn)狀
我國(guó)乳制品中***的殘留現(xiàn)狀不容樂(lè)觀,2006年的一份對(duì)北京、天津、石家莊5個(gè)零售點(diǎn)的77個(gè)牛奶樣品進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶的殘留檢測(cè),63.6%的樣品檢測(cè)為陽(yáng)性。一項(xiàng)對(duì)我國(guó)幾個(gè)大城市如西寧、南寧、廣州、杭州、泉州、北京等城市乳制品質(zhì)量的檢測(cè)調(diào)查結(jié)果顯示,在近八百份乳品采樣中,***殘留超標(biāo)居不合格項(xiàng)目**位。
2***殘留的來(lái)源及其危害
乳和乳制品中***殘留的來(lái)源要追尋到原料生產(chǎn)及其流通過(guò)程。首先,使用***防治動(dòng)物疫病。對(duì)患病奶牛用藥不當(dāng)及不遵守停藥期是造成牛奶中***殘留的重要因素。其次,***類(lèi)飼料添加劑的使用。第三,飼養(yǎng)戶(hù)和經(jīng)營(yíng)商為了保鮮,將***人為添加到畜產(chǎn)品中,來(lái)抑制微生物的生長(zhǎng)、繁殖,防止牛奶酸敗變質(zhì),也是造成***殘留超標(biāo)的重要因素。
從乳制品加工的角度來(lái)看,原料乳中***殘留物嚴(yán)重干擾發(fā)酵乳制品的生產(chǎn),***殘留可嚴(yán)重影響干酪、黃油、發(fā)酵乳的起酵和后期風(fēng)味的形成。長(zhǎng)期服用含低劑量***殘留的乳制品,日積月累會(huì)危害人體健康。主要危害表現(xiàn)在:其一,毒性作用,如長(zhǎng)期攝入氨基糖苷類(lèi)***嚴(yán)重超標(biāo)的乳產(chǎn)品可導(dǎo)致腎毒性和耳毒性。其二,過(guò)敏反應(yīng)。其三,病原菌耐藥性增加。其四,破壞人體胃腸道微生物菌群的動(dòng)態(tài)平衡。其五,妨礙我國(guó)畜產(chǎn)品的貿(mào)易。
3***殘留檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
目前***殘留檢測(cè)的方法很多,基本上可以分為四大類(lèi)型:一是經(jīng)典的微生物檢測(cè)方法;二是現(xiàn)代儀器分析方法;三是生化**分析法;四是專(zhuān)一試劑盒法。
3.1經(jīng)典微生物檢測(cè)法
其測(cè)定原理基于***對(duì)微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作檢測(cè)用,因而與臨床應(yīng)用的要求一致,但其測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)且結(jié)果誤差較大。如ttc法、戴爾沃檢測(cè)(delvotestsp)法、by法等。
3.1.1ttc法
ttc法是上較早通用的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法,也是我國(guó)鮮奶中***殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)(gb4689.27-94)規(guī)定的檢測(cè)法。如果牛奶中含有***,則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培育2.5-3h后,加入ttc指示劑(三苯基四氮唑)不發(fā)生還原反應(yīng),所以樣品呈無(wú)色狀態(tài);如果牛奶中不含***,則樣品呈紅色。ttc法檢測(cè)的各種***靈敏度如下:*為0.004單位、*0.5單位、*0.4單位、*5單位。ttc法主要對(duì)于*類(lèi)和***敏感,但對(duì)*不太敏感,對(duì)*根本不敏感,并且**劑可干擾ttc試驗(yàn)。ttc法檢測(cè)***殘留雖然費(fèi)用較低,但檢測(cè)方法消耗時(shí)間也相對(duì)較長(zhǎng),因此應(yīng)用受到一定限制。
3.1.2戴爾沃檢測(cè)(delvotestsp)法
是由荷蘭其試劑是由荷蘭dsm公司生產(chǎn)并由aoac認(rèn)證。原理是利用微生物——嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養(yǎng)2.5~3h后會(huì)產(chǎn)酸,酸引起指示劑bcp(溴甲酚紫)變?yōu)辄S色;若牛奶樣品中不含***,培養(yǎng)后樣品呈黃色,如樣品中含有***,嗜熱芽胞菌生長(zhǎng)受到抑制而無(wú)法產(chǎn)酸,指示劑將不變色??蓹z測(cè)到β-內(nèi)酰胺類(lèi)***在內(nèi)的更多***,如磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)等,其中對(duì)*和磺胺類(lèi)***特別靈敏。delvotestsp法操作方便,嚴(yán)格實(shí)用,容易判斷,結(jié)果可靠,費(fèi)用適中等優(yōu)點(diǎn);但也易出現(xiàn)假陽(yáng)性,此方法適用于農(nóng)場(chǎng)、企業(yè)、實(shí)驗(yàn)室及政府監(jiān)測(cè)部門(mén)。
3.1.3by法
by法,也稱(chēng)藍(lán)黃檢測(cè)法,是一種廣譜的微生物抑制法,能在較短的時(shí)間里檢測(cè)到乳制品中***的殘留,通過(guò)顏色的對(duì)比判斷陽(yáng)性、陰性和可疑樣品。b•linage等通過(guò)這種方法對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)等25種***進(jìn)行了檢測(cè),其殘留的檢測(cè)限與歐盟規(guī)定的檢測(cè)限很接近。此方法耗時(shí)短,操?gòu)暮?jiǎn)單,檢測(cè)***種類(lèi)較多,但誤差較大,容易誤檢。
3.2現(xiàn)代儀器分析方法
是利用***分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或理化特性,借助現(xiàn)代儀器對(duì)***殘留進(jìn)行**分析的一種方法。如色譜法、熒光法、毛細(xì)管電泳、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。
色譜法有氣相色譜(gs)、高效液相色譜(hplc)法、反相高效液相色譜法等。檢測(cè)的過(guò)程運(yùn)用了色譜理論,通過(guò)高靈敏度的檢測(cè)器,分離速度快、效率高和操作自動(dòng)化。一般要經(jīng)過(guò)樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟,能檢測(cè)***的具體含量。蔡穎用反相hplc法測(cè)定乳制品中*、四環(huán)素和*殘留量。檢測(cè)限為:*為15.0μg/kg、四環(huán)素為20.0μg/kg、*為18.0μg/kg。jianwang等運(yùn)用超高效液相色譜和飛行質(zhì)譜聯(lián)用(uplc/q-tofms)和lc/ms/ms測(cè)定牛奶中大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)***的殘留量,其檢測(cè)限為:*40ug/kg,泰樂(lè)菌素50ug/kg,*50ug/kg,能滿(mǎn)足各國(guó)對(duì)這六種β-內(nèi)酰胺類(lèi)***的*低檢出要求。
儀器分析方法分離速度快、效率高和自動(dòng)化程度高,能檢測(cè)***的具體含量,敏感性較高,結(jié)果準(zhǔn)確,但待檢樣品需經(jīng)一系列的預(yù)處理,繁瑣費(fèi)時(shí),還必須有相應(yīng)的價(jià)格昂貴的儀器設(shè)備。一般在大型實(shí)驗(yàn)室使用,適合于**測(cè)定。
3.3生化**法
目前應(yīng)用的生化**分析技術(shù),是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)。其基本原理是抗原抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合??煞譃槊嘎?lián)**測(cè)定法(elisa)、熒光**測(cè)定法(fia)、**分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用的方法等。
酶聯(lián)**吸附測(cè)定(elisa):以待測(cè)抗原(或抗體)與酶標(biāo)抗體(或抗原)的特異結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ),通過(guò)酶活力測(cè)定來(lái)確定抗原(或抗體)含量。因?yàn)榻Y(jié)合了**反應(yīng)和酶催化反應(yīng),所以是一種特異而又敏感的技術(shù)。yongjin運(yùn)用酶聯(lián)**法(elisa)對(duì)*的檢測(cè)限度為0.5ng/ml。bucknal等運(yùn)用**檢測(cè)法測(cè)定了在牛奶中幾種喹諾酮**的殘留量。酶聯(lián)**法測(cè)定,其敏感性和特異性好,檢測(cè)的靈敏度以普遍使用的β-內(nèi)酰胺類(lèi)計(jì):*為5ppb,*為10ppb,*為10ppb,頭孢西林為8ppb。其檢測(cè)結(jié)果快速準(zhǔn)確,9分鐘內(nèi)即可檢測(cè)出牛奶中β-內(nèi)酰胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)等***的殘留含量,可監(jiān)控牧場(chǎng)用藥的情況。
熒光**測(cè)定(fia)法原理是應(yīng)用一對(duì)單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮,檢測(cè)產(chǎn)物發(fā)出的熒光,熒光強(qiáng)度與抗原抗體復(fù)合物(mb)濃度呈正比,可在8min內(nèi)得出結(jié)果。結(jié)果以mb每小時(shí)釋放的速率表示(△mb)表示。huth已經(jīng)用熒光**法測(cè)定了牛奶中的6種β-內(nèi)酰胺類(lèi)***,得到它們的*低檢測(cè)限為:*g3.2μg/kg、氨芐*2.9μg/kg、羥氨芐*3.6μg/kg、頭孢匹林16.3μg/kg;該法重復(fù)性好,具有快速、敏感、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。生化**法測(cè)定***殘留靈敏度*,達(dá)到ng級(jí)水平;檢測(cè)快速、專(zhuān)一性強(qiáng)。由于此法的高度專(zhuān)一性,每檢測(cè)一種***就要制備或購(gòu)買(mǎi)相應(yīng)的抗原或抗體,導(dǎo)致檢測(cè)費(fèi)用較高。因此生化**檢測(cè)法不可能取代色譜或光譜等常規(guī)分析方法,只能作為其重要的補(bǔ)充。
4專(zhuān)一試劑盒法
eclipse試劑盒的原理是含有芽孢桿菌的瓊脂培養(yǎng)基和ph指示劑,當(dāng)在(65±1)℃下培養(yǎng)時(shí),孢子發(fā)育生長(zhǎng),降低培養(yǎng)基ph值,在ph指示劑的作用下,藍(lán)(紫)色變?yōu)榫G-黃色。生鮮牛乳中的***殘留使微生物生長(zhǎng)和酸的產(chǎn)生受到抑制,由于沒(méi)有酸生成,顏色將不會(huì)改變。。
eclipse試劑盒有eclipse50和eclipse100兩種試劑盒。eclipse50的**度雖然沒(méi)有eclipse100的高,但其檢測(cè)限都符合歐盟標(biāo)準(zhǔn),彌補(bǔ)了快速方法只能單一檢測(cè)某類(lèi)***的缺陷,同時(shí)提高了檢測(cè)的廣譜性和高靈敏度,同時(shí)也可以同歐盟等國(guó)家的*檢測(cè)技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)接軌我國(guó)的牛奶事業(yè)提供非常有效和準(zhǔn)確的***殘留檢測(cè)方法。且操作簡(jiǎn)單,靈活性強(qiáng),無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行任何的處理,只需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的方法進(jìn)行操作,就能獲得理想的效果,且不易出現(xiàn)假陽(yáng)性現(xiàn)象,被檢樣品的需要量少,且費(fèi)用低,越來(lái)越被廣泛應(yīng)用。
乳制品***殘留的檢測(cè)方法很多,有的操作煩瑣,有的實(shí)驗(yàn)條件要求高,有的檢驗(yàn)時(shí)間太長(zhǎng);這些不僅會(huì)給乳制品生產(chǎn)企業(yè)造成經(jīng)濟(jì)上和時(shí)間上的損失,而且檢測(cè)結(jié)果常常會(huì)被原輔材料和人為操作等因素所影響。牛奶中***殘留是涉及人類(lèi)健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題,開(kāi)發(fā)出越來(lái)越準(zhǔn)確、快速,誤差越來(lái)越小的檢測(cè)方法,方便地檢出乳和乳制品中***殘留,凈化消費(fèi)環(huán)璄,就能為居民的身心健康提供保障,促進(jìn)中國(guó)乳業(yè)健康發(fā)展。
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