1.溶液i—溶菌液:
*:它是糖苷水解酶,能水解菌體細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵,因而具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中ph小于8時(shí),*作用受到抑制。
葡萄糖:增加溶液的粘度,維持滲透壓,防止dna受機(jī)械剪切力作用而降解。
edta:(1)螯合mg2+、ca2+等金屬離子,抑制脫氧核糖核酸酶對(duì)dna的降解作用(dnase作用時(shí)需要一定的金屬離子作輔基);
(2)edta的存在,有利于*的作用,因?yàn)?的反應(yīng)要求有較低的離子強(qiáng)度的環(huán)境。
2.溶液ii-naoh-sds液:
naoh:核酸在ph大于5,小于9的溶液中,是穩(wěn)定的。但當(dāng)ph>12或ph<3時(shí),就會(huì)引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液ii中的naoh濃度為0.2mo1/l,加抽提液時(shí),該系統(tǒng)的ph就高達(dá)12.6,因而促使染色體dna與質(zhì)粒dna的變性。
sds:sds是離子型表面活性劑。它主要功能有:
(1)溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白,因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜。
(2)解聚細(xì)胞中的核蛋白。
(3)sds能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為r-o-so3-…r+-蛋白質(zhì)的復(fù)合物,使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來(lái)。
但是sds能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取過(guò)程中,必須把它去除干凈,防止在下一步操作中(用rnase去除rna時(shí))受到干擾。
3. 溶液iii--3mol/l naac(ph4.8)溶液:
naac的水溶液呈堿性,為了調(diào)節(jié)ph至4.8,必須加入大量的冰醋酸。所以該溶液實(shí)際上是naac-hac的緩沖液。用ph4.8的naac溶液是為了把ph12.6的抽提液,調(diào)回ph至中性,使變性的質(zhì)粒dna能夠復(fù)性,并能穩(wěn)定存在。
而高鹽的3mol/l naac有利于變性的大分子染色體dna、rna以及sds-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因?yàn)橹泻秃怂嵘系碾姾桑瑴p少相斥力而互相聚合,后者是因?yàn)殁c鹽與sds-蛋白復(fù)合物作用后,能形成較小的鈉鹽形式復(fù)合物,使沉淀更*。