一串紅(ｓａｌｖｉａｓｐｌｅｎｄｅｎｓ),又稱西洋紅、墻下紅,屬唇形科(ｌａｂｉａｔａｅ)鼠尾草屬(ｓａｌｖｉａｌ)。矮一串紅是普通一串紅雜交所得的ｆ1代,其株形美觀,花色艷麗,花期長,可盆栽欣賞又可用于布置花壇、道路、庭院,具有較高的觀賞價值和經(jīng)濟(jì)價值(柯合作,1998)。
矮一串紅種子發(fā)芽率低,扦插不易生根,因此種子繁殖和扦插繁殖難以滿足市場的需求。有關(guān)一串紅的組織培養(yǎng),除袁巧平、董茂山等(1988)用一串紅花枝誘導(dǎo)叢生芽使之長根形成完整植株外,至今未見其他報道。本試驗擬以矮一串紅帶腋芽的莖段為外植體,探究外植體的最適消毒時間,不同種類和濃度的生長調(diào)節(jié)劑對芽增殖的影響,為矮一串紅的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)參考。
1 材料與方法
1 1 材料
本試驗的矮一串紅為農(nóng)友種苗(中國)有限公司提供的種子播種產(chǎn)生的ｆ1代植株。于2000年10月,取帶腋芽的莖段為外植體。
1 2 培養(yǎng)基設(shè)計
初代培養(yǎng)基?。?:ｍｓ+ｂａ0 5+ｎａａ0 01 ｎ2:ｍｓ+ｂａ1 0+ｎａａ0 01?。?:ｍｓ+ｂａ0 5+ｎａａ0 1;繼代培養(yǎng)基:ｎ4:ｍｓ+ｂａ1 0+ｎａａ0 1?。?:ｍｓ+ｂａ3 0+ｎａａ0 1?。?:ｍｓ+ｂａ5 0+ｎａａ0 1;生根培養(yǎng)基?。?:1/2ｍｓ+ｉｂａ0 5 ｓ2:1/2ｍｓ+ｎａａ0 5?。悖?1/2ｍｓ。以上培養(yǎng)基ｐｈ值均為6 0,瓊脂濃度為0 8%,蔗糖濃度為2%。
1 3 外植體的消毒與接種
將矮一串紅的嫩莖去除葉片后切成3～4ｃｍ長的莖段→流水沖洗→加洗衣粉刷洗2～3ｍｉｎ沖凈→70%酒精消毒30ｓ→0 1%升汞消毒6～10ｍｉｎ→無菌水浸洗5次→切取長0 5～1 0ｃｍ的帶腋芽莖段接種→初代培養(yǎng)→切取無根苗的莖段→增殖培養(yǎng)→芽苗生根。
1 4 培養(yǎng)條件
溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1000～1500ｌｘ,光照時間為12ｈ/ｄ。
1 5 觀察記載的方法
接種后每5ｄ觀察一次,對成活數(shù)、萌芽數(shù)、芽的長度、生根數(shù)等項目進(jìn)行記載。
2 試驗結(jié)果
2 1 不同消毒時間對矮一串紅外植體成活率的影響以0 1%升汞為表面消毒劑,不同消毒時間對外植體成活率有較大影響,接種20ｄ后觀察發(fā)現(xiàn),處理6ｍｉｎ的外植體,莖段仍保持綠色,長出的芽較健壯;處理8ｍｉｎ的外植體雖然大部分都能萌發(fā),但芽體弱小;處理10ｍｉｎ的外植體切面變黑,整個材料焦黃萎縮,雖然小部分長出芽但芽較短小。從表1可以看出,外植體消毒6ｍｉｎ,成活率和萌芽數(shù)均大于8ｍｉｎ和10ｍｉｎ。消毒時間過長(10ｍｉｎ),外植體吸收較多的升汞,引起毒害,成活率、萌芽數(shù)下降。因此外植體的最適消毒時間為6ｍｉｎ。
2 2 培養(yǎng)基中不同生長調(diào)節(jié)劑組合對腋芽萌發(fā)的影響培養(yǎng)基中不同生長調(diào)節(jié)劑和濃度對矮一串紅腋芽萌發(fā)有較大影響,結(jié)果見表2。由表2可見,當(dāng)ｎａａ濃度為0 01ｍｇ/ｌ,ｂａ濃度為0 5～1 0ｍｇ/ｌ時,外植體萌芽數(shù)隨ｂａ濃度升高而增加,以ｂａ1 0ｍｇ/ｌ為最多。但其誘導(dǎo)的芽節(jié)間長,葉片短,長勢弱;ｂａ濃度為0 5ｍｇ/ｌ時,雖然萌芽數(shù)略低于ｂａ1 0ｍｇ/ｌ,但芽的長勢較壯。因此,腋芽萌發(fā)的最適ｂａ濃度當(dāng)為0 5ｍｇ/ｌ。而當(dāng)ｂａ濃度(0 5ｍｇ/ｌ)一定時,ｎａａ的濃度對萌芽數(shù)影響不大,但ｎａａ為0 1ｍｇ/ｌ時芽生長比ｎａａ0 01ｍｇ/ｌ健壯。由此可見,矮一串紅無菌系建立的適宜培養(yǎng)基為ｍｓ+ｂａ0 5+ｎａａ0 1。
2 3 芽苗的增殖情況將無菌苗切成0 5～1 0ｃｍ帶腋芽的莖段,接種到含不同生長調(diào)節(jié)劑組合的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的增殖,結(jié)果見表3。由表3可見:ｎａａ為0 1ｍｇ/ｌ時,ｂａ濃度高低對叢生芽的形成有較大影響。當(dāng)ｂａ為1 0～3 0ｍｇ/ｌ時,隨著ｂａ濃度的升高,芽的增殖系數(shù)逐漸增加,但達(dá)到一定濃度(5ｍｇ/ｌ)后,就會抑制芽的增殖,增殖系數(shù)顯著下降。
2 4 不同種類生長素對芽苗生根的影響將叢生芽分割下來接種到含不同種類生長素的培養(yǎng)基上,研究不同種類生長素對生根效果的影響,結(jié)果見表4。由表4可見,2種生長素均能誘導(dǎo)生根,生根率達(dá)100%。ｉｂａ誘導(dǎo)的根呈放射狀,主根不明顯,根較細(xì)長。而ｎａａ誘導(dǎo)的根,主根與須根分明,主根粗壯,長勢較好。因此ｎａａ誘導(dǎo)生根效果比ｉｂａ好。
3 討論
3 1 不同消毒時間對外植體成活率和萌芽率的影響以0 1%升汞為外植體的表面消毒劑,消毒時間長短對外植體的成活和生長有較大影響。消毒時間適合,升汞只起表面消毒作用。時間太長,外植體吸入升汞量較多,輕則對外植體產(chǎn)生毒害,抑制細(xì)胞分裂和新陳代謝,使芽苗生長減弱;重則使外植體中毒死亡。
3 2 不同生長素組合對芽苗增殖的效果在組織培養(yǎng)過程中,芽苗的發(fā)育受到細(xì)胞分裂素與生長素比例高低的調(diào)控,細(xì)胞分裂素能誘導(dǎo)不定芽形成,削弱頂端優(yōu)勢,促進(jìn)側(cè)芽的萌發(fā);而生長素能促進(jìn)細(xì)胞伸長,加強(qiáng)頂端優(yōu)勢。當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長素濃度比例適當(dāng)時,兩者能互相協(xié)同作用,有利于不定芽的形成與促進(jìn)叢生芽的抽生。在本試驗中當(dāng)ｎａａ的濃度為0 1ｍｇ/ｌ時,在ｂａ1 0～3 0ｍｇ/ｌ范圍,不定芽與叢生芽的形成隨著ｂａ濃度的升高而增加,并以3 0ｍｇ/ｌ最好;當(dāng)ｂａ濃度達(dá)5 0ｍｇ/ｌ時,對芽的形成起抑制作用。
3 3 不同種類生長素對矮一串紅芽苗生根的影響在誘導(dǎo)生根試驗中,生長素的參與能誘導(dǎo)維管束的形成,促進(jìn)根原基分化,使之具有分生能力的細(xì)胞,最終形成根(徐福壽,1992)。所以,ｎａａ和ｉｂａ的加入均能誘導(dǎo)生根。在本試驗中ｎａａ誘導(dǎo)生根的效果比ｉｂａ好,主要由矮一串紅本身的品種特性和ｎａａ的活性高于ｉｂａ所決定