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熒光PCR凍干-DTT

發(fā)布時(shí)間:2024-09-08
二硫蘇糖醇(簡(jiǎn)稱為dtt)是一種小分子有機(jī)還原劑,其還原狀態(tài)下為線性分子。dtt有什么特點(diǎn)?怎么保存呢?dtt是一種常用還原劑,有抗氧化作用,進(jìn)口分裝。dtt和巰基乙醇相比, dtt的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。另外dtt比巰基乙醇的濃度低7倍時(shí),兩者效果相近。dtt一般保存條件為-20℃保存。1m dtt溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化, dtt的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長(zhǎng)它的使用壽命。dtt作為pcr的添加劑與dmso、甜菜堿、bsa混合配制成的復(fù)合型添加劑,按照一定比例配比,能獲得pcr擴(kuò)增特異性和很高的pcr擴(kuò)增產(chǎn)量。pcr的擴(kuò)增反應(yīng)并不是可以無(wú)窮地進(jìn)行下去的,經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)周期后需擴(kuò)增的片段不再按指數(shù)增多而逐漸進(jìn)入平坡;進(jìn)入平坡的循環(huán)次數(shù),取決于起始時(shí)存在的模板拷貝數(shù)以及合成的dna總量。所謂平坡就是批pcr循環(huán)的后期,合成產(chǎn)物達(dá)0.3~1pmol時(shí),由于產(chǎn)物的堆積,使原來(lái)以指數(shù)增加的速率變成平坦的曲線。
試劑凍干機(jī)pilot3-6t應(yīng)用示例(熒光pcr凍干):
探針、底物、引物原料要求確定。凍干溶液配方開(kāi)發(fā),采用正交法或響應(yīng)曲面法進(jìn)行輔料篩選。選擇適合的包材和模具。設(shè)計(jì)凍干曲線配合輔料篩選。確定配方及工藝。穩(wěn)定性測(cè)試。根據(jù)穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果修正工藝或配方。整個(gè)環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。
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