如何使用人結(jié)核特異性外膜抗體elisa試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清樣本中結(jié)核特異性外膜抗體表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人結(jié)核特異性外膜抗體表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中結(jié)核特異性外膜抗體相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與hrp標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（od值），與cutoff值相比較，從而判定標(biāo)本中人結(jié)核特異性外膜抗體的存在與否。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1瓶
8
陽性對(duì)照
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
陰性對(duì)照
0.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑a液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張
6
顯色劑b液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
操作步驟
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品od值<臨界值（cut off）者為類結(jié)核特異性外膜抗體陰性
陽性判定：樣品od值≥臨界值（cut off）者為類結(jié)核特異性外膜抗體陽性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2m的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月