一、茶籽萌發(fā)生理
茶樹的繁殖可以分有性繁殖和無性繁殖。前者如種子繁殖,后者如扦插與壓條繁殖,以及近年來興起的細(xì)胞與組織培養(yǎng)。
茶樹是一種異花授粉植物,在遺傳特性上是高度雜合的,這是因?yàn)榉N子中的胚是從親本的雌蕊和花粉得到不同的染色體組合,所以在遺傳上不同于兩個(gè)親本。在田間條件下相應(yīng)地出現(xiàn)生長(zhǎng)狀況的不一致性。相反,營(yíng)養(yǎng)繁殖和體細(xì)胞再生體的植株只含有親本的遺傳信息。因此用無性繁殖法育苗時(shí),茶園中的群體生長(zhǎng)便很大程度上表現(xiàn)為均勻和整齊一致。
1.茶籽萌發(fā)生理
剛采收的茶籽,即使放在適宜的條件下,也不能萌發(fā),這是因?yàn)椴枳颜幱谛菝郀顟B(tài)、茶籽休眠的主要特點(diǎn)與芽休眼相似,是生長(zhǎng)的中止。茶籽休眠也是對(duì)不良環(huán)境條件適應(yīng)的有效手段。由于休眠的存在,使得種子不會(huì)在秋季采收后的不利環(huán)境條件下萌發(fā),而只有當(dāng)外界條件適宜時(shí),才能萌發(fā)。通過休眠,種子能巧妙地避免寒冷與干燥等不利條件的影響,因而能夠在低溫干旱的環(huán)境下安全地生存。
在生產(chǎn)上,茶籽播種前常采用浸種催芽,提高茶籽生活力。凡經(jīng)過水選浸種的可以提前11天左右發(fā)芽,增進(jìn)發(fā)芽率達(dá)13%。茶籽種皮較厚,經(jīng)過浸種后,組織變松軟,透性增加,滲透壓增大,有利于氣體交換,有利于水分的吸收,因而內(nèi)在有機(jī)物質(zhì)因吸水而分解,使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)增加,這些都有利于萌發(fā)。茶籽發(fā)芽過程中最重要的生理活性,是胚恢復(fù)生長(zhǎng)并發(fā)育為獨(dú)立的幼苗,茶籽開始發(fā)芽時(shí)所發(fā)生的主要變化有:茶籽發(fā)生水合作用;呼吸作用增加;酶的周轉(zhuǎn)加快;核酸增加;貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)化為可溶性產(chǎn)物并運(yùn)輸?shù)脚咧?,用于合成?xì)胞的組成部分,細(xì)胞分裂次數(shù)增加,體積也隨之增大,最后分化為組織和器官。
(1)茶籽萌發(fā)過程中的水合作用
茶籽必須吸水才能增加原生質(zhì)的水合作用,并啟動(dòng)與發(fā)芽有關(guān)的代謝作用鏈。吸水使堅(jiān)硬的種殼變軟,子葉、胚吸水膨脹,種殼破裂,使胚根最先露出。不論茶籽原有含水量多少,要達(dá)到破殼萌發(fā),一般含水量要達(dá)50~60%。茶籽萌發(fā)過程中吸水有一定階段性,先高后低,到萌芽出土,含水又有回升。休眠期的茶籽含水量約為20%,到破殼期露胚根時(shí)含水量上升到50~60%,以后吸水轉(zhuǎn)緩,到幼苗出土?xí)r含水量達(dá)70%~75%。這是由于萌發(fā)初期子葉原生質(zhì)膠狀物質(zhì)急速轉(zhuǎn)化為溶膠狀態(tài),需要大量水分。胚根、胚芽露出時(shí),因新組織能吸收部分水分,含水量稍有下降。胚芽出土伸長(zhǎng)期,細(xì)胞擴(kuò)大,水分又增加。
(2)茶籽萌發(fā)過程中的呼吸作用
休眠期茶籽的吸氧量特別少,但當(dāng)茶籽萌發(fā)吸水時(shí)就迅速增加,一般和吸水速率呈相關(guān)性。但當(dāng)茶籽呼吸活性增加之后,對(duì)氧的吸收即趨穩(wěn)定。
呼吸作用包含主要是淀粉、糖、蛋白質(zhì)、脂肪等有機(jī)成分的氧化分解,同時(shí)產(chǎn)生大量atp形式的能量,用于合成種子儲(chǔ)藏組織內(nèi)貯備養(yǎng)料分解時(shí)所需要的酶,以及隨之而來的幼苗細(xì)胞成分的形成。
①碳水化合物的變化 茶籽休眠時(shí)含有少量淀粉酶,在發(fā)芽初期,不溶性的淀粉和貯藏糖類轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄蕴穷?、以后隨著前發(fā)過程的進(jìn)展,淀粉酶和磷酸化酶的活性增強(qiáng),因此淀粉含量明顯減少,比休眠時(shí)大約減少一半以上,同時(shí)可溶性糖類從子葉組織運(yùn)往胚的生長(zhǎng)部分。
②蛋白質(zhì)和有機(jī)酸的轉(zhuǎn)化 茶籽含蛋白質(zhì)約10%左右,茶籽萌發(fā)新組織,氮源來自于葉貯藏的蛋白質(zhì)。貯藏蛋白質(zhì)的減少伴隨著氨基酸和酰胺的增加,接著在胚的各生長(zhǎng)部分合成新的蛋白質(zhì)。茶籽萌發(fā)過程中,蛋白質(zhì)含量顯著減少,由休眠到前發(fā)約減少50%。而氨基酸到萌發(fā)時(shí)增加到34%左右,有的可增至60~70%。
茶籽除含氨基酸外,還有檸檬酸、蘋果酸和草酸等各種有機(jī)酸。其變化進(jìn)程是,休眠茶籽中檸檬酸的含量占有機(jī)酸含量的絕大部分,萌發(fā)40天以后的幼苗,檸檬酸大量增加,并同時(shí)形成蘋果酸和天門冬酰胺,此時(shí),蘋果酸大部分存在子葉中。萌發(fā)后的幼苗根系蘋果酸、草酸的含量比莖多;在60天的幼苗中可見到少量奎寧酸的合成,并由莖部轉(zhuǎn)入葉部,它可促進(jìn)多酚類化合物的合成。
③脂肪的變化 茶籽含粗脂肪約25~35%,到前發(fā)時(shí),含量就逐漸下降,胚根胚芽出現(xiàn)時(shí),比原始量減少40%。
貯藏在茶籽內(nèi)的脂肪首先在酯酶作用下水解為甘油和脂肪酸。水解產(chǎn)生的脂肪酸有的重新用于合成磷脂和糖脂,這些物質(zhì)是細(xì)胞器和膜的必需成分。但是,大部分脂肪酸則轉(zhuǎn)化為乙酸輸酶a,然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)的糖酵解途徑合成糖。
(3)茶籽萌發(fā)過程中的核酸變化
幼苗生長(zhǎng)時(shí)需合成蛋白質(zhì)。核酸在細(xì)胞核內(nèi)起著遺傳信息的貯存和表達(dá)的作用,此外,在蛋白質(zhì)的合成中也有重要作用。一般而言,發(fā)芽時(shí)子葉中的核酸減少,胚中核酸增加。
(4)茶籽萌發(fā)過程中酶活性和多酚類化合物的變化
茶籽由休眠到萌發(fā),由于氧化還原作用而產(chǎn)生了各種酶,如過氧化氫酶、過氧化物酶、多酚氧化酶等。休眠茶籽的胚、子葉和皮膜中存有過氧化物酶,沒有多酚氧化酶。而過氧化物酶主要在胚中,貯存量比子葉約多1倍。但經(jīng)過萌發(fā)后,不但形成多酚氧化酶,而且過氧化酶隨著呼吸作用的增加而增加。
茶樹新陳代謝以酚類化合物——茶單寧轉(zhuǎn)化為主,茶籽休眠時(shí)有少量茶單寧,這主要是在胚發(fā)育過程中形成的。當(dāng)茶籽吸脹后便把貯藏物轉(zhuǎn)化為酚類化合物,當(dāng)葉片形成時(shí)茶多酚含量迅速增加,這是由于茶多酚的形成主要依賴葉片的緣故。
二、茶樹營(yíng)養(yǎng)繁殖的生理特性
營(yíng)養(yǎng)繁殖所產(chǎn)生的新個(gè)體,不是通過兩性細(xì)胞的結(jié)合,而是由分生組織直接分裂的細(xì)胞所產(chǎn)生,因此營(yíng)養(yǎng)繁殖是無性繁殖,也就是再生繁殖。
茶樹是一種再生能力很強(qiáng)的樹種,由于有這樣的特性,便可以利用茶樹的各器官,無論根、莖、葉甚至細(xì)胞,來進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)繁殖。
(1)扦插的生理
扦插是用茶樹莖葉作為繁殖材料,促使其發(fā)生不定根,培養(yǎng)成完全獨(dú)立植株的一種無性繁殖法,是目前生產(chǎn)上普遍采用的一種繁殖方式。
①茶樹的再生機(jī)能 具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的村體,都是由本分化的胚性細(xì)胞經(jīng)過重復(fù)分裂繁殖,并在形態(tài)和生理上進(jìn)一步分化、發(fā)育而來的。
在細(xì)胞分裂繁殖所產(chǎn)生的新細(xì)胞中,大部分已不再具有分生能力,而形成永久性組織的細(xì)胞,但有少部分繼續(xù)保持其分生能力,這部分存在于莖或根的生長(zhǎng)點(diǎn)和形成層,作為分生組織而保留下來。
可是當(dāng)茶樹某一部分受傷或被切除而樹體的協(xié)調(diào)受到破壞時(shí),能夠表現(xiàn)出一種彌補(bǔ)損傷和恢復(fù)協(xié)調(diào)的機(jī)能,這種機(jī)能稱為再生作用。
從母體上切取的插穗,能進(jìn)一步通過生理結(jié)構(gòu)的調(diào)整,恢復(fù)細(xì)胞的分裂活動(dòng),再次形成完整的植株個(gè)體,這是再生機(jī)能的另一種表現(xiàn)形式。
②插穗生根的機(jī)理 茶樹插穗基部切面上的受傷細(xì)胞,由于原生質(zhì)的分解而產(chǎn)生一種創(chuàng)傷激素,并且被內(nèi)層未受傷的健全細(xì)胞所吸收,使健全細(xì)胞的細(xì)胞膜木栓化,而將死傷細(xì)胞同健全細(xì)胞隔離。在切口處的創(chuàng)傷激素和插穗上部轉(zhuǎn)移來的生長(zhǎng)激素以及其他生根誘導(dǎo)物質(zhì)的作用下,切口內(nèi)層的健全細(xì)胞發(fā)生與切面相平行的分裂,而形成愈傷組織。這種愈傷組織在形成層和篩管部位特別發(fā)達(dá),對(duì)插穗切口可起到一定程度的保護(hù)作用,防止病原菌侵入,同時(shí)也可防止插穗中有效物質(zhì)的流失。此時(shí),生長(zhǎng)素的活動(dòng)增強(qiáng),進(jìn)一步促進(jìn)了愈傷組織的細(xì)胞分裂,愈傷組織薄壁細(xì)胞逐漸開始分化,形成愈傷木質(zhì)部。它先同插穗中水分和養(yǎng)分的通道輸導(dǎo)組織連通,再同愈傷組織木質(zhì)部的外側(cè)連接,而發(fā)展成為根原始體,最后形成根。
茶樹插穗的根原始體(即根原基),是一小團(tuán)分生組織,在植物生長(zhǎng)激素的作用下,一般發(fā)生在插穗基部切口或插穗下部近切口的部位,而且多出現(xiàn)在有葉的一側(cè)。但是根原始體發(fā)生的部位和形狀往往隨品種和插穗條件而異,它可能從愈傷組織內(nèi)發(fā)生,也可能和愈傷組織沒有關(guān)系,而直接從插穗基部、切口上部皮層發(fā)生,或從莖部和愈傷組織兩處發(fā)生。
(2)影響發(fā)根的生理因子
影響發(fā)根的因子包括,扦插枝的性質(zhì)和外界條件。
①枝條性質(zhì)與發(fā)根 茶樹樹冠不同部位的枝條,其性質(zhì)結(jié)構(gòu)隨著空間分布和年齡的不同,表現(xiàn)了異質(zhì)性,它們?cè)谇げ搴蟮陌l(fā)根和成活率也不同。一般樹齡較幼,枝條較為成熟的,扦插后容易發(fā)根,生長(zhǎng)較好。近根須處發(fā)出的枝條,由于比較接近于種子胚軸,因此容易發(fā)育成根。枝條性質(zhì)的差異,實(shí)質(zhì)表現(xiàn)在淀粉和糖分含量上。一般莖含氮和可溶性糖高的,特別是雙糖/單糖比值大的,發(fā)根較好。存在這些差別的原因主要是幼年樹木的枝條分生組織多、生長(zhǎng)活性高,合成作用占優(yōu)勢(shì)。幼年樹莖的單糖含量少而雙糖/單糖比值高,這是因?yàn)楹粑?,單糖消耗較多的關(guān)系。莖部含氮量隨著年齡的增長(zhǎng)而遞減,年齡老的木質(zhì)化程度高,生理機(jī)能便有所減退。因此,在生產(chǎn)實(shí)踐中,往往利用望中含淀粉較多的時(shí)期進(jìn)行扦插,并且提倡扦插枝要粗壯,要帶有新葉片,以促進(jìn)早發(fā)根。
②水分與插穗的關(guān)系 凡插穩(wěn)含水分多的發(fā)根和成活率均較良好,含水少的發(fā)根則差。此外,插穗含水量雖然良好,但插后不再給予適宜水分,也影響發(fā)根。
③發(fā)根與生態(tài)條件的關(guān)系 發(fā)根好壞,除插穗本身因素外,與生態(tài)條件(如氣溫、土壤溫度和土壤水分狀況等)也有密切的關(guān)系。
氣溫是發(fā)根的重要生態(tài)條件。氣溫高低影響水分代謝和物質(zhì)代謝的程度與速度。在低溫時(shí)插穗的生理活動(dòng)受到抑制。一般茶樹再生活動(dòng)要求的最適溫度為20~28oc。在高溫、足水的條件下,呼吸旺盛,代謝進(jìn)行快,愈傷組織形成迅速,發(fā)根良好,但在高溫缺水情況下,發(fā)根則差。土溫過高,細(xì)胞分裂快,呼吸劇烈,物質(zhì)消耗大,對(duì)發(fā)根不利,如土溫連續(xù)在35oc高溫下,不但對(duì)發(fā)根有影響,而且會(huì)使地上部葉片受灼傷。
土壤水分對(duì)扦插成活率影響也很大,一般土壤含水在40%左右時(shí),大部分枯死。扦插成活發(fā)根率隨土壤含水的增加而提高。一般以土壤含水量80~90%時(shí)發(fā)根率和根的生長(zhǎng)最好。
(3)插穗生根能力和生根所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
扦插時(shí)為了提高成活率,除應(yīng)注意防止干旱和腐爛,還必須選用生根能力強(qiáng)的插穗,而且在適合生根的苗床條件下進(jìn)行扦插,盡量縮短容易枯死的生根前的時(shí)間。但是,插穗的生根能力不僅因茶樹品種的遺傳特性而不同,即使同一品種,由于枝條部位、插穗年齡,剪穗時(shí)間等不同,其生根能力也有很大差別。
插穗生根首先要形成根原始體,然后發(fā)展成為根的組織,因此要求插穗具有較強(qiáng)的生活力,而且具備促進(jìn)根原始體形成的物質(zhì),以及根組織的發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
碳水化合物和氮素化合物,不僅是插穗生根和根生長(zhǎng)所不可缺少的,而且也是插穗在生根之前維持其生存的重要能源。特別是碳水化合物中的糖類,更是生根所必需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。氮素化合物不僅關(guān)系著根原始體的形成,而且可以促進(jìn)根和地上部的生長(zhǎng)。
在應(yīng)用氮素化合物促進(jìn)生根時(shí),有機(jī)態(tài)的氮素化合物比無機(jī)化合物的效果好,例如精氨酸對(duì)促進(jìn)生根就很有效。一般而言,插穗本身的碳水化合物或氮素化合物含量已能滿足生根的需要。在生根過程中,與其說是碳水化合物和氮素化合物含量不足,還不如說是兩者的比例不當(dāng)。一般認(rèn)為,對(duì)碳水化合物含量來說,氮素化合物含量越低,即 c/n比越大時(shí),生根越好。
三、茶樹組織培養(yǎng)的生理基礎(chǔ)
隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,茶樹繁殖方法并不限于種子或營(yíng)養(yǎng)體,而且可用組織、細(xì)胞甚至原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)成株。這是由于植物細(xì)胞具有全能性,即細(xì)胞攜帶著一套完整的基因組,在合適的培養(yǎng)條件下,具有產(chǎn)生完整植株的能力。這是體細(xì)胞在其生命周期中的基本特性。
具有全能性的細(xì)胞大體可分為三類:
①受精卵(即合于) 配子在減數(shù)分裂過程中經(jīng)過聯(lián)合和交換而發(fā)生分離,經(jīng)過授精后形成合子,它們有巨大的發(fā)育潛力,可進(jìn)一步發(fā)育成種子。這種材料的特點(diǎn)是在遺傳上經(jīng)過減數(shù)分裂交換和染色體隨機(jī)分離,再經(jīng)配子融合形成合子這樣的兩次基因重新組合。如果兩個(gè)親本是人工選定的優(yōu)良組合,合子或幼胚離體培養(yǎng)經(jīng)分化后的再生植株中,可能分離出多種優(yōu)良類型作為育種的原始材料。
②發(fā)育中的分生組織細(xì)胞(包括幼嫩器官的細(xì)胞) 在發(fā)育的植株中,分生組織的細(xì)胞全能性保持得最好,如根、嫩莖、幼葉、花等許多器官中的細(xì)胞也均具有全能性。這些材料通過培養(yǎng),可以獲得與供體極為類似的大量茶樹植株。
③雌雄配子及單倍體細(xì)胞 它們?cè)诨蚪M中成對(duì)的等位基因只剩下一份,因此其主要特點(diǎn)是基因表達(dá)充分。在此情況下顯性的和隱性的基因均可充分顯現(xiàn),這對(duì)育種過程中的選擇和淘汰是十分有利的,由它們形成的細(xì)胞無性系也是基因工程中理想的受體材料。
目前在茶樹上已能利用葉子、子葉、嫩莖(帶腋芽)、成熟胚、未成熟胚、子葉柄、花藥等作為外植體,通過培養(yǎng),誘導(dǎo)出完整植株??梢灶A(yù)料,細(xì)胞全能性的進(jìn)一步開發(fā)和利用,可望創(chuàng)造出更多的茶樹新品種,并為營(yíng)養(yǎng)繁殖開拓更廣闊的途徑。