環(huán)凱培養(yǎng)基檢驗(yàn)原理:胰酪胨、大豆木瓜蛋白酶水解物提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是凝固劑。
環(huán)凱培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。
環(huán)凱培養(yǎng)基使用方法:
1、稱取水解酪蛋白胨(mh)瓊脂38g,加入蒸餾水或去離子水1 l,攪拌加熱煮沸至*溶解,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15min,備用。
2、試驗(yàn)菌液的制備:從tsa平皿上挑取3—5個(gè)形態(tài)相似的菌落頂端部分接種mhb或tsb培養(yǎng)基。經(jīng)36±1℃培養(yǎng)4—6小時(shí)后,比濁至0.5麥?zhǔn)蠁挝弧?br>3、接種:用無(wú)菌棉拭浸取比濁好的菌液,在管壁內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)壓除去過(guò)多菌液,然后再輕輕涂抹培養(yǎng)基,每一平皿涂抹三次。每次涂抹后均需將平皿轉(zhuǎn)動(dòng)60度,再行下一次涂抹。每一質(zhì)控菌株涂抹三個(gè)平皿。
4、貼片:接種后的平皿置室溫片刻,待稍干后,用無(wú)菌鑷子將抗生素紙片均勻貼布于平皿瓊脂表面。各紙片間中心間距不得小于24mm,紙片距平皿邊不得小于15mm。一旦紙片接觸瓊脂表面,即不可再移動(dòng),因此時(shí)藥物已開(kāi)始擴(kuò)散。
5、培養(yǎng):紙片貼妥后,在15—30分鐘內(nèi),將平皿翻過(guò)來(lái)置于36±1℃培養(yǎng)16—24h后,觀察結(jié)果。平皿培養(yǎng)時(shí)不宜堆放,以二個(gè)相疊為宜。
環(huán)凱培養(yǎng)基特點(diǎn):
1.采用國(guó)內(nèi)的培養(yǎng)基原料;核心成分采用進(jìn)口原料。
2.干粉細(xì)膩均勻、易溶解、配置后澄清透明。
3.凝固點(diǎn)低、利于傾注平板及減少對(duì)微生物的熱損傷。
4.瓶身瓶蓋特別避光設(shè)計(jì)。改良后的內(nèi)墊圈緊緊吸附于瓶蓋上不易脫落,防潮性能尤佳。
5.中英文雙語(yǔ)標(biāo)識(shí)。
環(huán)凱培養(yǎng)基的滅菌方式簡(jiǎn)述
1.首先將環(huán)凱培養(yǎng)基內(nèi)層滅菌筒取出,再向外層鍋加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。
2.放回滅菌桶,并裝入待滅菌物品。三角瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞,
3.加蓋,將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓。
4.通電加熱,并同時(shí)打開(kāi)排氣閥,使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣*排盡后,關(guān)上排氣閥,讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升,當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí),控制熱源,維持壓力至所需時(shí)間。
5.滅菌所需時(shí)間到后,切斷電源,讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí),打開(kāi)排氣閥,旋松螺栓,打開(kāi)蓋子,取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí),打開(kāi)排氣閥,就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降,使容器內(nèi)的環(huán)凱培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶或試管口,造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。