精液主要由精漿組成。睪丸曲細(xì)精管內(nèi)的生精細(xì)胞在垂體前葉*的作用下,經(jīng)精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞及精子細(xì)胞幾個階段的分化演變,后發(fā)育為成熟的精子,此過程約需70天,70%的精子貯存于附睪內(nèi),2%于輸精管內(nèi),其余儲契于輸精管的壺腹腔部,精囊僅存少量。精子隨精漿一起經(jīng)輸精管、尿道排出體外。精漿由精囊液、前列腺液以及睪丸、附睪、
輸精管、尿道旁腺、尿道球腺分泌的少量液體混合而成。
精液中水約占90%,固體成分約占10%,有形成分除精子外,尚含少量白細(xì)胞和生殖道脫落的上皮細(xì)胞等。精漿的化學(xué)成分十分復(fù)雜,除前面提到的成分外,還有各種精漿蛋白(白蛋白、免疫球蛋白、纖維蛋白原、α2巨球蛋白、纖維蛋白等,總濃度為55/75g/l)、酶類(酸性磷酸酯酶、乳酸脫氫酶-x、*等)、激素、微量金屬無素等。
精液檢查包括精子的形態(tài)、當(dāng)選量和功能;以及精漿的生物百分比學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)及精子功能等。
精液檢查的主要的目的有:①評價男性生育功能,為不育癥的診斷和療效觀察提供了依據(jù);②輔助男性生殖系統(tǒng)疾病的的診斷;③輸精管結(jié)扎術(shù)后的療效觀察;④計(jì)劃生育和科研;⑤為人工授精和精子庫的篩選優(yōu)質(zhì)精子;⑥法醫(yī)學(xué)鑒定。
一、標(biāo)本采集
1.準(zhǔn)備工作①向受檢者解精液檢查的意義,標(biāo)本采集方法和注意事項(xiàng)。②標(biāo)本采集室在實(shí)驗(yàn)室附近,室溫應(yīng)控制在20-35攝氏度。室內(nèi)必須清潔、肅靜、無人為干擾;③采集標(biāo)本前禁欲3-7天。④采集精液前排凈尿液。
2.采集方法:將一次射出和全部精液直接排入潔凈、干燥的容器內(nèi)(為能用乳膠*)。開始射出的精液精子濃度高。終末部分精子濃度低。采集微生物培養(yǎng)標(biāo)本須無菌操作。
3.標(biāo)本運(yùn)送:精液采集后應(yīng)立即送檢。溫度低于20攝氏度或高于40攝氏度將影響精子活動故冬季應(yīng)注意保溫,可將標(biāo)本瓶裝入內(nèi)衣袋貼身運(yùn)送。
4.標(biāo)本采集次數(shù):因精子生成日間變動較大,不能僅憑一次檢查結(jié)果做診斷。一般應(yīng)間隔1-2周檢查一次。連續(xù)檢查2-3次。
二、一般性狀檢查
(一)量
精液*液化后測定其排出量。有生育力的正常男性一次2-6毫升,平均3.5ml。一次精量與頻度呈負(fù)相關(guān)。若禁欲5-7天精量仍少于2毫升,視為精液減少;否則,稱為無精液癥(aspermia)。精漿是精子活動的介質(zhì),并可中和生殖道的酸性分泌物,以免影響精子活力。精液量減少(精漿不足)不利于精通過生殖道進(jìn)入子宮和輸狼管,影響受精。若一次精量超過8毫升,精子被稀釋,也不利于生育。此可因垂體前葉促性腺素的分泌功能亢進(jìn),使雄激素的水平升高所致亦可見于禁欲時間過長者。
(二)外觀
1.顏色和透明度:正常精液呈灰白色,自行液化后為半透明的乳白色,久未采精液者可略顯淺黃色。凡精液呈鮮紅、淡紅、暗紅或醬油色并含有大量紅細(xì)胞者稱為血精,可能由于前列腺和精非特異性炎癥、生殖系結(jié)核、腫瘤或結(jié)石所致黃色或棕色膿性精液見于前列腺炎和精囊炎。
2.粘稠度:正常情況下新排出的精液迅速凝成膠胨狀,然后逐漸變化。若新排出的精液呈米湯樣,可能為先天性精囊或精囊液流出管道阻塞所致精液稀薄,粘稠度下降,也要見于精子濃度太低或無精子癥時。
(三)氣味
正常精液具有栗花和石楠花的特殊氣味,由于前列腺液產(chǎn)生。
(四)液化時間
精液液化時間是指新排出的精液人膠胨轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂闪鲃訝顟B(tài)所需的時間。有關(guān)精液凝固與液化的過程極其復(fù)雜,有相當(dāng)多的物質(zhì)參與,例如前列腺與精囊分泌物等都可能影響其時間長短,此外也受溫度影響。在室溫下,正常精液排出后60分鐘內(nèi)液化。前裂腺炎時,由于其功能影響,導(dǎo)致液化時間延長,甚至不液化,不液化可抑制精子活動力,而影響生育能力。
三、化學(xué)檢查
精漿中的一些生化標(biāo)志物可反映副性腺性功能。例如檸檬酸、鋅、*轉(zhuǎn)酞酶和酸性磷酸酶反映前列腺功能;果糖和前列腺素反映精囊功能;游離左旋肉毒堿、甘油磷酸*和α葡萄苷酶反映附睪功能。這些特異性標(biāo)志物總排出量降低反映分泌功能低下,可用以評價男性副性腺的分泌功能。
(一)ph
精液ph測定應(yīng)在獲得精液1小時內(nèi)完成,放置時間延長,ph下降。正常精液ph為7.2-8.0。如ph<7并伴少精癥,可能是由于輸精管、精囊或附睪發(fā)育不全。
弱堿性的精液射入生殖道后可中和生殖道分泌物中的有機(jī)酸,利于精子游動。當(dāng)ph<7或>8時均影響精子活動。
(二)果糖
精漿中的果糖來自精囊液,由精囊所分泌。它是精子活動的能源。精子軸絲收縮依賴stp供給能量,而atp可由果糖分解產(chǎn)代謝產(chǎn)生,故精漿果糖濃度減低將使精子活動力減弱,影響受精率。在先天性精囊缺如時無果糖,精囊疾病如精囊炎時果糖下降。
[參考值] ≥13μmol/一次采集量
(三)酶類
1.酸性磷酸酶(acid phosphatase,acp)精漿中的酸性磷酸酶幾乎全部來自前列腺,屬前列腺酸性磷酸酶。因此測定精漿中acp有助于了解前裂腺功能和對前列腺疾病的診斷。前列腺炎時pap活性減低;前列腺癌和前列腺肥大時,pap活性可增高。pap有促進(jìn)精子活動的作用。精漿中pap減低,精子活動減弱,可使受精率下降。
[參考值] >200u/一次精量(β-硝基酚法)
2.乳酸脫氫酶-x(ld-x)精液中有6種乳酸脫氫酶同工酶,其中l(wèi)d-x活性強(qiáng),約相當(dāng)于ld總活性的1/3。ld-x在是存在于精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子線粒體中特異酶,具有組織特異性,對精子生成、代謝、獲能、活動能力和受精過程均有重要作用。
ld-x測定常用電泳法,但較繁瑣。1988年國內(nèi)建立了直接比色法,方法方便,易于普及。
[參考值] ld-x/ld>40%
[臨床意義] ld-x活性和相對活性與精子濃度特別是活精子濃度呈良好的正相關(guān),活性減低可致生育力下降。ld-x活性可作為評價男性生育功能的指標(biāo)。睪丸萎縮患者,ld-x活性降低或消失。*服用棉酚可致精子生成障礙,甚至無精子生成,精液ld-x活性也降低或甚至消失。這說明ld-x活性與睪丸生精功能有關(guān),是病人睪丸生精功能的良好指標(biāo)。
3.精子頂體酶(acrosin)存在于精子項(xiàng)體內(nèi),是一種蛋白水解酶,在受精過程中起重要作用,可用n-苯甲酰-l-*乙酯-醇脫氫酶(n-benzoy –l-arginine sthyl esteralcohol dehydrogenase,baee-adh)法測定。
[參考值] baww-adh法(x±s)36.72±21.43u/l
[臨床意義]在項(xiàng)體反應(yīng)中項(xiàng)體酶和其它的水解酶一起釋放,使卵細(xì)胞透明帶水解,釧使精子進(jìn)入卵細(xì)胞,完成受精過程,項(xiàng)體酶還能促進(jìn)生殖系統(tǒng)中的激肽釋放,增強(qiáng)精子活力,促進(jìn)精子運(yùn)動,有利于受精。精子項(xiàng)體酶活性減低將致生育力下降。據(jù)報道不育組項(xiàng)體酶活性顯著低于生育組。因此可將精子項(xiàng)體酶活性作為病人精子受精能力和診斷男性不育癥的參考指標(biāo)。
(四)精漿鋅
精漿中含多種微量元素,其中以對鋅的研究較多,精漿鋅比血義鋅濃度高,能促進(jìn)生殖器官發(fā)育,維持正常生精功能,提高精子濃度和活力。精漿鋅減低可致生殖器官發(fā)育不良、精子生成減少、死精癥等。嚴(yán)重缺陷鋅可致不育癥。精漿鋅測定可作為評價男性生育功能和診治不育癥的參考指標(biāo)之一。
[參考值] zn(x±s)2.4μmol/一次精量
四、顯微鏡檢查
(一)涂片檢查
精液化后充分混勻制成壓滴片,篩檢有無精子及精子能否運(yùn)動。若未查到精子,尚須制備濃縮標(biāo)本離心法復(fù)檢。如仍查不到精子,則可判定為無精子癥;若僅見少量精子,則稱為精子缺乏;若查到的精子全部不運(yùn)動,則可能為死精子癥,但須經(jīng)體外活體染色檢查方能確定。
涂片檢查也是檢查輸精管結(jié)扎效果的常規(guī)方法。一般于術(shù)后經(jīng)5-6次排精,原貯于附睪和精囊內(nèi)的精子已排凈。通常于術(shù)后第六周開始檢查。每周1-2次。若連續(xù)三次查不到精子則可認(rèn)為手術(shù)成功。否則說明手術(shù)失敗。
(二)精子活動力和存活率
1.活動力:精子活動力(sperm motility)是指精子向前運(yùn)動的能力。who將其分為四級:*:精呈前向運(yùn)動;b級:慢或呆滯的前向運(yùn)動;c級:非向前運(yùn)動;d級:不動。
精子活動力受溫度和保存時間的影響。精液射出后于37攝氏度條件下放置8小時,全部精子將失動活動力。因此必須使用液化后的新鮮標(biāo)本檢查。
活動力正常值:排精后60分鐘內(nèi),精子50%或更多具有前向運(yùn)動,25%或更多具有快速前向運(yùn)動。精子活動力減弱或死精子過多是導(dǎo)致不育的主要原因。
2.精子存活率以“活”粗子比率表示,若不活動的精子較多,應(yīng)時持體外活體染色檢查,以鑒別其死活?;罹拥募?xì)胞膜能阻止伊紅y、臺盼藍(lán)等染色劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),故不被染色;死精子細(xì)胞膜完整性受損。失去屏障功能,可被染色成橘紅或藍(lán)色。有生育力男性伊紅染色法的活精子率≥75%。
[臨床意義]精子活動力與受精的關(guān)系十分密切。精子活動力低下,難以抵達(dá)輸卵管或無力與卵子結(jié)合而不能完成受精過程。a綿活動力的精子量不足也會影響受精率。若連續(xù)檢查,精子存活率不足40%,且以c級活動力精子為主,則可能成為男性不育的原因之一。精子活動力下降,見于:①精索靜脈曲張,由于靜脈血回泫不暢,導(dǎo)致溫度升高及睪丸組織缺氧,使精子活動力下降;②生殖系非特異性感染以及使用某些抗代謝藥、抗瘧藥、雌激素、氧化氮芥等時。
(三)精子數(shù)量
通過精子計(jì)數(shù)可求得精子濃度,乘以精液量還可求得一次排精排出的精子總數(shù)。正常成年男性,精子數(shù)量個體間的差異較大,精子濃度為(50-100)×109/l。<20×109/l為少精子癥;正常人一次排精子總數(shù)為≥40×106。精子數(shù)量減低可見于:①精索靜脈曲張;②有害金屬和放射性損害;③先天性和后天性睪丸疾病(如睪丸畸形、萎縮、結(jié)核、淋病、炎癥等);④輸精管、精囊缺陷;⑤老年人在50歲以上者精子生成減少。
(四)精子形態(tài)?
通常用于精子形態(tài)學(xué)檢查的方法的有兩種,一種是制成新鮮濕處副縣長相差顯微鏡觀察;加一種是將精子固定、染色后用亮視野光學(xué)顯微鏡觀察。兩處方法檢查的精子形態(tài)無明顯差別,染色后精子頭可能稍有縮小。
1.正常精子形態(tài)檢測政黨精子形態(tài)的應(yīng)遵循嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn):①正常精子頭部呈橢圓形,其正常標(biāo)準(zhǔn)為頭部長度為4.0-5.5μm,寬為2.5-3.0μm,長與寬的比值為1.5-1.75項(xiàng)體區(qū)占頭部的40-70%;②必須不存在頸、中段或尾部的缺陷;③細(xì)胞質(zhì)微粒不大于正常頭部的1/3;④將所的處于邊沿異常狀態(tài)的清子均列為不正常。
2.有缺陷精子:用這種形態(tài)學(xué)分析方法考慮的精子細(xì)胞功能部位,因此認(rèn)為沒有必要常規(guī)的去區(qū)分所有頭部大小和形態(tài)之間可劃或尾部缺陷之間的變異如果大多數(shù)精子細(xì)胞中出現(xiàn)某一種部位的異常,則應(yīng)對這一普通的缺陷給予注釋。需記錄的缺陷有:
(1)頭部形狀、大小缺陷:包括大頭、小頭、錐形頭、梨頭、無定形頭、空泡樣頭(頭部大于20%區(qū)域出現(xiàn)不著色的空泡區(qū)、)雙頭或以上缺陷的聯(lián)合體。
(2)頸、中段缺陷:包括缺尾可見到游離或脫落的頭部,未附著或彎曲尾尾與頭部長軸結(jié)呈90度角,腫脹、不規(guī)則、彎曲的中段,異常薄的中段無線粒體鞘或以上任何類型缺陷的聯(lián)合體。
(3)尾部異常:包括短尾、多尾、發(fā)夾狀尾、斷尾、寬度不規(guī)則或卷尾、或尾部伴有末端微滴,或以上任何類型缺陷的聯(lián)合體。
(4)細(xì)胞質(zhì)微粒:大于正常頭部的面積的1/3。細(xì)胞質(zhì)微粒一般位于頸可中段部分,也有未成熟精子微粒沿尾部分而布在不同部位。
許多形態(tài)學(xué)的異常的精子有多種缺陷。當(dāng)多種缺陷同時存在時,只記錄一種,但應(yīng)優(yōu)先記錄頭部缺陷,其次為中段缺陷,后為尾部缺陷。每種精子缺陷的平均數(shù)目稱為畸形精子指數(shù),是預(yù)測精子在體內(nèi)、體外功能有意義的指標(biāo),因此形態(tài)學(xué)分析應(yīng)該是多參數(shù)原,應(yīng)分別記錄每種缺陷。異常形態(tài)見下圖。
精子形態(tài)
[臨床意義]正常精液中正常形態(tài)的精子應(yīng)≥30%,精液中正常形態(tài)的精子減少稱畸形精子癥,與睪丸、附睪的功能異常密切相關(guān)??梢娪谏诚蹈腥?。精南疆靜脈曲張、雄性激素水平異常時;某些化學(xué)藥物(如硝基唪喃妥英)、遺傳因素也可影響睪丸生精功能,導(dǎo)致畸形精子增多。
(五)未成熟的生殖細(xì)胞
未成熟的男性生殖細(xì)胞即生精細(xì)胞,包括精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母的細(xì)胞和以育不*的精子細(xì)胞。這神經(jīng)過敏細(xì)胞胞體較大,常有1-2個核,有時易與中性粒細(xì)胞相混淆,尤其是用未染色精液鏡檢時不易識別,需在時可用過氧化物酶染色鑒別,前者為陰性,后者為陽性,正常人未成熟精細(xì)胞<1%。當(dāng)曲細(xì)精管受到藥物或其它因素的影響或損害時,精液壓中可見較多的病理型生精細(xì)胞。
五、免疫學(xué)檢查
據(jù)who估測,在育齡夫婦原因不明的不育癥中,免疫性不育占約10-20%,近年來對免疫性不育機(jī)制的研究發(fā)展很快,了解到抗精子抗體是引起免疫性不育的重要原因之一。
(一)抗精子抗體
精子的抗原性很強(qiáng),不僅可引起的異種免疫和同種異體免疫,其器官特異性抗原尚可引起自身抗精子抗體的產(chǎn)生,精管阻塞、睪丸損傷、炎癥、附睪等副性腺感染均可使精子抗原進(jìn)入血循環(huán)或淋巴系統(tǒng),激活免疫系統(tǒng)引起免疫應(yīng)答,產(chǎn)生身身抗精子抗體。精子出現(xiàn)包被抗體是免疫性不孕典型特征,精液中精子抗體幾乎全部為iga、igg、iga的臨床意義可能更為重要,igm在精液中極為罕見。asab與精子結(jié)合后可引起精子凝集、制動;抑制精子的項(xiàng)體活性,使之難以穿透包圍卵細(xì)胞的放射冠和透明帶,阻礙精了與卵細(xì)胞結(jié)合,即使完成受精過程亦可導(dǎo)致死胎或流產(chǎn)。檢測抗精子抗體的試驗(yàn)有:
1.精子凝集試驗(yàn)(sperm agglutination test,sat)血清、生殖道分泌物中存在的asab與精子膜固有抗原結(jié)合,使精子出出頭-頭、頭-尾、尾-尾的凝集現(xiàn)象。用試管玻璃片凝集法可或淺盤凝集法無凝集,或觀察10個高倍視野6個以上視野無凝集者表示生育力正常。
2.精子制動試驗(yàn)(sperm immobilization test,sit)asab與精子表面抗原相互作用激活補(bǔ)體系統(tǒng),使精子項(xiàng)體破壞,膜通透性及完整受損,導(dǎo)致精子失去活力,正常時精子制動值<2。
3.免疫珠試驗(yàn):免疫珠是用兔抗*共價結(jié)合的聚丙烯酰胺微球,可同時檢測iga、igg、igm抗體。用洗滌后的精子懸液與免疫珠懸液混合后,免疫珠會粘附于表面有抗體的精子上,使用相關(guān)差顯微鏡觀察,大于等于20%的活動精子同免疫珠粘附時為陽性,但至少有50%活動精子被免疫珠免疫被才認(rèn)為有臨床意義。
4.混合免疫球蛋白試驗(yàn)(mar試驗(yàn))用混合的未加處理的新鮮精液與包被人igg的膠乳?;旌?,再向混合液中加入特異的單克隆抗人igg血清,在膠乳粒與活動精子之間形成混合凝集證明精子表面有igg抗體存大。這可用為常規(guī)篩選方法。大于等于50%的活動精子同顆粒粘附表示可能為免疫性不育;10-50%活動精子與顆粒粘附,可疑為免疫性不育。
免疫珠試驗(yàn)與mar試驗(yàn)兩者結(jié)果并非經(jīng)常一致免疫珠試驗(yàn)與血清精子凝集試驗(yàn)和制動試驗(yàn)呈正相并。如這些試驗(yàn)為陽性,還應(yīng)輔經(jīng)其它試驗(yàn)以加強(qiáng)診斷的正確性。
asab還可用其它現(xiàn)更敏感的方法檢測如免疫酶法等,不育夫婦asab陽性者占25%-30%,其所針對的抗原絕大多數(shù)在精子膜上。
(二)精漿免疫抑制物質(zhì)
人類精液含30多種抗原,但其進(jìn)入女性生殖道后通常并不引起免疫應(yīng)答,這是因?yàn)樵诰珴{中含有免疫抑制物質(zhì)(seminal plasma immunoinhibition material,spia)。spim免疫抑制效應(yīng)可能是多種物質(zhì)綜合作用的結(jié)果,其中的妊娠相關(guān)蛋白a亦稱為男性抑制物質(zhì)能抑制機(jī)體對精子的免疫反應(yīng),保護(hù)受精卵免受排斥,以難維持正常生殖生理過程,據(jù)研究,mim活性減低與不育癥、習(xí)慣性流產(chǎn)、配偶對丈夫精液過敏等疾病密切相關(guān)的。一但mim減低,對自身和配偶的asab形成抑制作用減弱,則抗體生成率增高;加一方面對asab的抗精了反應(yīng)亦缺乏抑制力,故可引起上術(shù)疾病。mim檢測對上述疾病的診斷具有重要的意義。
精漿免疫抑制物質(zhì)測定常用spim抗補(bǔ)體試驗(yàn)和mim單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)。
(三)精漿免疫球蛋白測定
正常男性精漿iga、igg、igm含量分別為(90.3±57.7)mg/l (28.6±16.7)mg/l (2.3±1.9)mg/l.抗精子抗體陽性者igm增高,生殖系炎癥者分泌型iga增高。
六、微生物學(xué)檢查
男性生殖道任何部位感染均可從精液是檢出微生物。迄今已人精液中檢出的微生物達(dá)30多種。包括細(xì)菌、支原體、病毒和原蟲等。常見的病在微生物有*、鏈球菌、淋病奈瑟菌、大腸埃希菌、類白喉?xiàng)U菌、解脲支原體等。若炎癥部位有較多的上皮細(xì)胞脫落,還可能在細(xì)胞內(nèi)查沙眼衣原體包涵體的單純皰疹病毒及巨細(xì)胞病毒包涵體等。據(jù)報道由生殖道感染所致不育癥發(fā)病率比非感染不育癥高四倍。
精液的細(xì)菌學(xué)檢查應(yīng)在常規(guī)消毒的條件下,采集精液于無菌容器內(nèi),常規(guī)涂片進(jìn)行革蘭氏染色或抗酸染色檢查等,亦可于37攝氏度液化30分鐘后作細(xì)菌培養(yǎng);需氧培養(yǎng)結(jié)果>1000cfu/ml方有臨床意義。
近年來淋病奈瑟菌引起的生殖道感染有所增加,許多實(shí)驗(yàn)室開展了淋球菌快速檢查項(xiàng)目,如直接熒光抗體染色等,亦有應(yīng)用pcr技術(shù)檢查者。直接熒光抗體染色靈敏度高,但特異性差,pcr技術(shù)需嚴(yán)防污染。
七、精子功能檢查
精子與卵結(jié)合除精子濃度和數(shù)量因素外,還必須具備妝好的運(yùn)動功能和對宮頸粘液、卵細(xì)胞放射冠、透明帶及卵細(xì)胞膜的穿透力。精子穿透力是評價精子功能的主要指標(biāo)之一,據(jù)報告,約18%精液常規(guī)檢查正常的精子不能穿透宮頸粘液,所以檢查精子功能對研究精子在體內(nèi)運(yùn)行,受精能力發(fā)及男性不育的原因有重要價值,其常用的試驗(yàn)有:
1.體內(nèi)穿透試驗(yàn):(in vivo penetration test)又稱性交后試驗(yàn)。檢查于排卵期性交后一定時間內(nèi)宮頸中粘液活精子數(shù)量,存活率及活運(yùn)動力,以評價精子對宮頸粘液的穿透能力,正常人可見>50個hpf有正常活動能力的精子。當(dāng)宮頸粘液異常或有抗精子抗體時,精子體內(nèi)穿透能力減弱或喪失。其結(jié)果還受雌激素分泌狀況等多種因素影響。
2.體外穿透試驗(yàn)(in vitro,penetration test)
(1)簡化玻片試驗(yàn):將一滴宮頸粘液置載正玻片上,用蓋玻片鋪平,兩片之間的厚度用哇化的玻璃珠控制,在載玻片兩側(cè)各滴一滴精液,使懷蓋玻片邊緣接觸,借毛細(xì)作用將精液移向蓋玻片,使宮頸粘液與精液之間現(xiàn)一清晰接觸界面,37攝氏度卵育30分鐘。精子在接觸界面處形成一指狀突起伸入粘液,精子穿過指狀突起進(jìn)入精液,然后呈扇形散開運(yùn)動。本試驗(yàn)的觀察指標(biāo)為:①粗精了子穿透并有90%以上具有明確直線運(yùn)動的活動精子時為正常結(jié)果;②精子穿透粘液,但離開粘液與沮液接觸面<500μm為較差;③精子穿透粘液,但很快失活或僅作擺動力為異常;④精子未穿透與精液的接觸界面,精子接觸界面的精液側(cè)凝集為異常結(jié)果。
本試驗(yàn)常帶來有一定的主觀性,因?yàn)樵谄矫娌A鲜咕赫骋河|界面的大小和形狀*標(biāo)準(zhǔn)化是不可能和,因?yàn)槎芏ㄐ栽u價精子粘液的相互作用。
(2)精子宮頸粘液接觸(sperm-cervical mucus contact,scmc)試驗(yàn):本試驗(yàn)的目的是檢驗(yàn)精液和燥頸內(nèi)是否存在損害精子運(yùn)動功能的asab及其損害程度,精子與近排卵期的宮頸粘液等量混合,富強(qiáng)溫下作用30min,鏡下計(jì)數(shù)擺動的精子,求出擺動精子的出現(xiàn)率(%),以單獨(dú)的精液滴鏡檢作為精子活力的對照,擺動精子的出現(xiàn)率越高,意味著精子不能穿過宮頸粘液。說吸asab對精子運(yùn)動功能的損害越重,見表1。
表1asab對精子運(yùn)動功能損害
scmc實(shí)驗(yàn)結(jié)果
擺動精子(%)
精子運(yùn)動功能受損
陰性
0-25
無
弱陽性
26-50
輕微(可疑)
陽性
51-75
明顯
強(qiáng)陽性
76-100
嚴(yán)重
玻片試驗(yàn)與scmc試驗(yàn)陽性者可用其它供者的精液或燥頸粘液分別進(jìn)行交叉試驗(yàn),以利于判斷asab的來源是清液或燥頸粘液。
(3)無透明帶倉鼠卵-精子穿透試驗(yàn)(zone free hamstar egg sperm penetration test,zfhespt)簡稱精子倉鼠卵穿透試驗(yàn)是一種極為嚴(yán)格的生物學(xué)試驗(yàn),技術(shù)復(fù)雜,影響因素多。若能加強(qiáng)質(zhì)量控制,再加上其它客觀檢查如精子活力等,可作為測定功能和基礎(chǔ)。
其方法將精子于bww培養(yǎng)液中經(jīng)37攝氏度獲能,再與用*外理去除透明帶的倉鼠混合繼續(xù)孵育完成受精過種程。然后以相差顯微鏡檢查,計(jì)數(shù)卵子受精率和受精指數(shù)。
受精率(%)=受精卵數(shù)/卵細(xì)胞總數(shù)×100%
由于卵細(xì)胞已去除透明帶一個卵細(xì)胞可被多個精子穿透。fi為穿透卵細(xì)胞的精子總數(shù)與卵細(xì)胞總數(shù)之比,從整體上反映精子穿透力與項(xiàng)體反應(yīng)。fi越高說明精子受精能力越強(qiáng)。
fi=穿透卵細(xì)胞的精子數(shù)/卵細(xì)胞總
[參考值]受精率≥10%
[臨床意義]精子倉鼠卵穿透試驗(yàn)可測定人精子的獲能、項(xiàng)體反應(yīng)和對卵細(xì)胞的穿透性能,綜合反映精子的受精能力,生育力正常的男性本試驗(yàn)結(jié)果正常者占82%,不育癥患者僅有2%正常,因此對不育癥的診斷有較高的應(yīng)用價值,穿透力較高的精子可選作人工授精用,成功率較高。