材料和方法
病例的一般資料收集 2016 年 8 月-2018 年 8 月蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液內(nèi)科經(jīng)細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)（micm）確診的初發(fā)急性髓系白血病患者 108 例，其中男 61 例，女 47 例；中位年齡55（13-79）歲。依據(jù) fab 分型標(biāo)準(zhǔn)：除去 1 例急性混合細(xì)胞白血病，其余 aml-m1 8 例，aml-m245 例，aml-m3 10 例，aml-m4 18 例，aml-m5 25 例，m6 1 例。
試劑與儀器
dna 提取試劑盒為上海源奇生物醫(yī)藥科技生物公司產(chǎn)品；引物合成為生工生物工程有限公司產(chǎn)品；pcr 試劑盒為日本 takara 公司產(chǎn)品；瓊脂糖為上海百研生物科技公司產(chǎn)品；tae 為廣州賽國生物科技公司產(chǎn)品；溴化乙錠為江蘇凱基生物公司產(chǎn)品。低溫高速離心機(jī)為美國 thermo 科技公司產(chǎn)品；lx-400 迷你離心機(jī)為海門市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀為美國 biotek 儀器有限公司；pcr 儀為美國 applied biosystems 公司產(chǎn)品；水平式凝膠電泳槽及電泳儀均為上海 tanon科技公司產(chǎn)品；全自動凝膠成像系統(tǒng)為上海 tanon科技公司產(chǎn)品?；蚪M dna 的制備按照 dna 抽提試劑盒說明書要求（上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司）提取基因組dna，測定吸光度，所有用于pcr的dna樣本的od260/280比值均＞ 1.8，去離子水稀釋基因組 dna 樣品至 50-150 ng/μl。目的基因的 pcr 擴(kuò)增根據(jù) genbank 上目標(biāo)基因序列，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成：正義鏈：5′-gactgagtacaaactggtgg-3′，反義鏈：5′-tgcataactgaatgtataccc-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長度 250bp；pcr 擴(kuò)增的反應(yīng)體系 50 μl：10×pcr buffer（mg2+）5 μl + dntp mixture 4 μl + 引物 f 0.5 μl+ 引物 r 0.5 μl + tap 酶 0.25 μl + dna 標(biāo)本 2 μl，去離子水補(bǔ)足體積（pcr 試劑盒來自寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司）。
結(jié) 果
nras 基因 pcr 擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果及基因測序圖列于圖 1、圖 2。108 例 aml 患者中發(fā)現(xiàn)，11 例有 nras 突變，其中 g12d 6 例、g13d 3例、g61k 2 例，突變率為 10.2%。108 例 aml 患者中 105 例有完整核型分析資料。10 例 nras 突變患者擁有可供分析的染色體核型，其中 4 例為正常核型，故其在正常核型中的突變率為 7.84%，與未突變組比較無明顯差異（p＞ 0.05）。細(xì)胞遺傳學(xué)高危、中危、低?；颊叻謩e 為 1 例、6 例 和 3 例， 所 占 比 分 別 為 12.5%、10.17%、4.55%。3 組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析亦無明顯差異（p＞ 0.05）。
討 論
nras 基因編碼是一種 21kd 的膜蛋白，其作為一種“分子開關(guān)”，位于細(xì)胞膜表面，可以將細(xì)胞外的信號轉(zhuǎn)至細(xì)胞核，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡 。而 nras 突變主要是集中在外顯子 1、2 處涉及 12、13、61 密碼子的錯義突變，其作為目前*的致人 aml 的 2 類合作突變中的ⅰ類突變，賦予細(xì)胞增殖和生存優(yōu)勢，從而參與 aml的發(fā)生發(fā)展。
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