細(xì)胞凍存是細(xì)胞學(xué)研究中的重要內(nèi)容，而細(xì)胞凍存液的配制及使用方法對于細(xì)胞凍存的成功率有著非常重要的影響。傳統(tǒng)上，使用的是含有血清的細(xì)胞凍存液，但是血清的存在也會(huì)引發(fā)各種細(xì)胞培養(yǎng)難題，如批次之間的不一致性，提純與使用難度等等。為解決這些問題，近些年來，研究者們開發(fā)了不含血清的凍存液，但是，還不同于含有血清的凍存液有很多使用上的要點(diǎn)需要重視。一、無血清細(xì)胞凍存液的物質(zhì)
細(xì)胞凍存液的成分和ph值是影響細(xì)胞凍存的重要因素。在無血清細(xì)胞凍存液中，3%甘油在保證細(xì)胞生存率的前提下，能夠緩解細(xì)胞因凍存造成的壓力。此外，dmso、乙二醇和peg等復(fù)合凍存液的存在，也影響細(xì)胞凍存后的生存率。因此，在配制無血清細(xì)胞凍存液的時(shí)候，需要注意成分的搭配，選擇合適的成分組合以及保證ph值的合理性。
二、無血清細(xì)胞凍存液的配制
在物質(zhì)的選擇基礎(chǔ)上，細(xì)胞凍存液的配制工作也非常關(guān)鍵。首先需要選擇高質(zhì)量的無菌去離子水，并將其高溫消毒。在消毒的過程中需要嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間，以免富含礦物的水成分揮發(fā)或者水體中出現(xiàn)細(xì)菌。其次，將各種化學(xué)試劑按照一定比例搭配混合，調(diào)整ph值，配制成凍存液。在配制時(shí)，根據(jù)細(xì)胞的種類、生長狀態(tài)以及所需要遭受的物理、化學(xué)刺激程度，考慮不同配方時(shí)需要注意控制條件的嚴(yán)謹(jǐn)性以及方案的合理性。
三、細(xì)胞的凍存方法
凍存是細(xì)胞凍存中的核心環(huán)節(jié)。在進(jìn)行凍存前，需要掌握熟練的操作技巧，并在保證無菌條件的基礎(chǔ)上，控制凍存過程的溫度和時(shí)間，以確保凍存后細(xì)胞的完整和生存率。具體來說，可以依次進(jìn)行以下步驟：
1.將細(xì)胞進(jìn)行離心處理，去除培養(yǎng)基，加入凍存液混合均勻；
2.按照一定比例分裝入凍存管中，密封好，放入冰箱，調(diào)低溫度；
3.升級冰箱的溫度，待冷卻后，放入冷凍機(jī)中；
4.讓樣品緩慢地降溫至-80℃，在-80℃的溫度下，待樣品逐漸進(jìn)入冬眠狀態(tài)；
5.將樣品轉(zhuǎn)入液氮罐中，保存在液氮罐內(nèi)的-196℃下。
四、細(xì)胞的解凍方法
解凍是細(xì)胞凍存的另一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。良好的解凍方法是保障細(xì)胞后續(xù)生長和研究的前提。具體來說，解凍時(shí)需要遵循以下基本規(guī)則：
1.使用預(yù)先洗凈的工具，為防止細(xì)菌引入；
2.以恒溫水浴的方式進(jìn)行解凍，溫度控制在37℃；
3.解凍完成后，將細(xì)胞液勻加入到預(yù)先配置好的培養(yǎng)基中；
4.對細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏囟取囟忍荻群捅Ｗo(hù)條件調(diào)節(jié)，進(jìn)行培養(yǎng)。
五、無血清細(xì)胞凍存液使用的注意事項(xiàng)
無血清細(xì)胞凍存液使用時(shí)需要注意一些基本的操作細(xì)節(jié)，如：
1.在液氮罐中保存時(shí)間不宜過長，建議在持續(xù)不超過半年或一年的情況下使用；
2.凍存液可用于一定程序的連續(xù)凍存與解凍，但不能超過細(xì)胞耐受的極限；
3.注意無血清細(xì)胞凍存液的配方和制備成分，以及不同細(xì)胞的特殊要求；
4.合理利用凍存液的多余量，以防使用中不夠。
以上就是細(xì)胞凍存前必須知道的無血清細(xì)胞凍存液使用方法。在配制、凍存、解凍以及使用過程中，需要注意的方面非常多，尤其是對于孕育具有特殊功能的細(xì)胞而言，要想保證其活性，采用無血清細(xì)胞凍存液的使用方法。除此之外，還有其他方面需要詳細(xì)了解，相信在不斷的實(shí)踐中，我們能夠更加熟練、更加高效地開展細(xì)胞凍存工作。