pcr簡介
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,pcr）是一種用于放大擴(kuò)增特定的dna片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊dna復(fù)制，pcr的特點是能將微量的dna大幅增加。
1983年美國kary mullis首先提出設(shè)想，1985年由其發(fā)明了聚合
酶鏈反應(yīng)，即簡易dna擴(kuò)增法，意味著pcr技術(shù)的真正誕生。mullis在1993年獲得化學(xué)諾貝爾獎，世界稱之為pcr教父。《紐約時報》如此評價：“具有高度原創(chuàng)性和重大
意義，幾乎將生物學(xué)分為 pcr 前和 pcr 后兩個時代?！?經(jīng)過演化和革新，pcr技術(shù)已經(jīng)發(fā)展了三代：普通pcr技術(shù)、實時熒光定量pcr技術(shù)（qpcr）以及數(shù)字pcr（dpcr）技術(shù)。
圖1 pcr儀器的發(fā)展歷程（lee ny., 2018）
pcr原理
pcr由變性、退火和延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
①模板dna的變性：模板dna經(jīng)高溫（95℃左右）加熱一定時間后，使其解離成單鏈，以便它與引物結(jié)合；
②模板dna與引物的退火（復(fù)性）：將溫度降至55℃左右時，引物與模板dna單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合；
③引物的延伸：再將溫度調(diào)至72℃左右（dna聚合酶反應(yīng)溫度），dna模板和引物結(jié)合物在taq dna聚合酶的作用下，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，沿著磷酸到五碳糖（5'→3'）的方向合成一條新的與模板dna鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。這樣經(jīng)變性、退火和延伸重復(fù)若干個循環(huán)后，就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。
圖2pcr反應(yīng)原理（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）
pcr分類
由于其多功能性，pcr技術(shù)近年來不斷發(fā)展，導(dǎo)致了幾種不同類型的pcr技術(shù)的發(fā)展。
熒光染料法（sybr green）
熒光探針法（taqman技術(shù)）
pcr技術(shù)關(guān)鍵原料
pcr反應(yīng)體系（供參考）
10×擴(kuò)增緩沖液
10μl
4種dntp混合物（終濃度）
各100～250μmol/l
引物（終濃度）
各5～20μmol/l
模板dna
0.1～2μg
taq dna聚合酶
5～10 u
mg2+（終濃度）
1～3mmol/l
補(bǔ)加雙蒸水
100 μl
pcr反應(yīng)五要素：引物（pcr引物為dna片段，細(xì)胞內(nèi)dna復(fù)制的引物為一段rna鏈）、酶、dntp、模板和緩沖液（其中需要mg2+）。
pcr應(yīng)用
pcr（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是目前成熟、臨床應(yīng)用廣泛的分子診斷技術(shù)。與其他技術(shù)相比，pcr技術(shù)具有靈敏度高、特異性好、及時方便等優(yōu)點，已經(jīng)成為許多臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，廣泛應(yīng)用于感染性疾病病原體檢測、腫瘤基因檢測、血篩、遺傳病基因檢測等多個領(lǐng)域。
國盛醫(yī)學(xué)pcr原料酶
酶是分子檢測試劑原材料中核心的組分，直接影響分子檢測試劑的靈敏度、穩(wěn)定性、檢測時間等多項性能水平，決定了分子檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。國盛醫(yī)學(xué)pcr原料酶整體解決方案，可提供種類齊全、質(zhì)量優(yōu)越的產(chǎn)品供您選購：