透射電鏡簡(jiǎn)介:
透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,簡(jiǎn)稱tem),可以看到在光學(xué)顯微鏡下無法看清的小于0.2um的細(xì)微結(jié)構(gòu),這些結(jié)構(gòu)稱為亞顯微結(jié)構(gòu)或超微結(jié)構(gòu)。要想看清這些結(jié)構(gòu),就必須選擇波長(zhǎng)更短的光源,以提高顯微鏡的分辨率。1932年ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡,電子束的波長(zhǎng)要比可見光和紫外光短得多,并且電子束的波長(zhǎng)與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比,也就是說電壓越高波長(zhǎng)越短。目tem的分辨力可達(dá)0.2nm。
透射電鏡制備注意事項(xiàng)(細(xì)胞):
1、細(xì)胞數(shù)量:> 1*10的6次方;。
2、消化細(xì)胞時(shí)要注意不要過度,及時(shí)用含血清的培養(yǎng)液終止消化;
3、終止消化后,預(yù)冷的pbs (ph7.4 )洗細(xì)胞1-2次,離心( 1500rpm, 5min) 棄上清(細(xì)胞好收集在1.5ml 的ep管中);
4、加入1ml 2.5%戊二醛溶液(需用pbs配制該溶液),可用吸管輕輕吹散細(xì)胞,使細(xì)胞懸浮于固定液中;
5、4度固定過夜后寄出(寄送時(shí)加冰袋,并用2.5%戊二醛溶液將ep管中剩余空間充滿)。
透射電鏡實(shí)驗(yàn)流程:
1、取材
2、固定
3、脫水
4、包埋
5、固化
6、超薄切片機(jī)切片(50-60 nm)
7、3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色
8、透射電鏡觀察,拍片