過(guò)氧化氫酶（catalase，cat）試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/48 樣
測(cè)定意義：
cat(ec 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是zui主要的 h2o2清除酶，
在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
h2o2在 240nm下有特征吸收峰，cat 能夠分解 h2o2，使反應(yīng)溶液 240nm下的吸光度隨反
應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出 cat活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：60ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：60ml×1瓶，4℃保存；
試劑二：100 ul×3瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?br>1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104
個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml提
取液） ，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200w，超聲 3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；
8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，
加入 1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 240nm處，蒸餾水調(diào)零。
2、cat檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在每瓶試劑二（100 ul）中加入 20ml試劑一，充分混勻，
作為工作液；用不完的試劑 4℃保存一周；
3、測(cè)定前將 cat檢測(cè)工作液 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴10min。
4、取 1mlcat檢測(cè)工作液于 1ml石英比色皿中，再加入35μl樣本，混勻；室溫下立即測(cè)
定 240nm下的初始吸光值 a1和 1min后的吸光值 a2，計(jì)算 δa=a1-a2
cat 活性計(jì)算：
1、血清（漿）cat活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化 1nmol h2o2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
cat(u/ml)= [δa×v反總÷（ε×d）×109
]÷v樣÷t=678×δa
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中cat活力計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化1nmol h2o2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
cat(u/mg prot)=[δa×v反總÷（ε×d）×109
]÷(v樣×cpr) ÷t=678×δa÷cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g組織每分鐘催化 1nmol h2o2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
cat(u/g 鮮重)=[δa×v反總÷（ε×d）×109
]÷(w× v樣÷v樣總)÷t=678×δa÷w
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化 1nmol h2o2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
cat(u/104
cell)＝[δa×v反總÷（ε×d）×109
]÷（500×v樣÷v樣總）÷t =1.356×δa
v反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3
l；ε：h2o2摩爾消光系數(shù)，4.36×104
l / mol /cm；d：
比色皿光徑，1cm；v樣：加入樣本體積，0.035 ml；v樣總：加入提取液體積，1 ml；t：
反應(yīng)時(shí)間，1 min；w：樣本質(zhì)量，g；cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細(xì)胞或細(xì)菌總
數(shù)，500 萬(wàn)。