海藻糖酶(treh)真核蛋白操作步驟：
ⅰ 實體組織蛋白的提取
1． 在每1ml 冷lysis buffer加入10 μl磷酸酶抑制劑， 1 μl蛋白酶抑制劑和 5μl 100mm pmsf，混勻。冰上保存數分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 ml冷 lysis buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉移到1.5ml預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（bradford法、bca法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10ml/150mm培養(yǎng)板的冷pbs洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10ml/150mm培養(yǎng)板的冷pbs，1000轉/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1ml冷 lysis buffer加入10μl磷酸酶抑制劑， 1μl蛋白酶抑制劑和5μl 100mm pmsf，混勻。冰上保存數分鐘待用。
4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷lysis buffer，加入量如下表所示：
細胞數量
lysis buffer加入量
107個
0.5 ml～1 ml
5×106個
0.2 ml～0.5 ml
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（bradford法、bca法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融
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