由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌,因此,要用稀酸或稀堿將其ph調(diào)至中性或微堿性,以利于細菌的生長繁殖。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下:
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
nacl 5g
瓊脂 15—20克
水 1000ml
ph 7.4—7.6
一、器材
牛肉膏,蛋白胨, nacl,瓊脂;
1mol/l naoh, 1mol/l hcl;
試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,玻棒,培養(yǎng)基分裝器,扭力天平,牛角匙,高壓蒸汽滅菌鍋,ph試紙( ph 5.5—9.0),棉花,牛皮紙,記號筆,麻繩,紗布等。
二、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作步驟
1.稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、nacl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮,在稱取時動作要迅速。另外,稱藥品時嚴防藥品混雜,一把牛角匙用于一種藥品,或稱取一種藥品后,洗凈、擦干,再稱取另一藥品,瓶蓋也不要蓋錯。
2.溶化
在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒攪勻,然后,在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完-全溶解后,補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最-后補足所失的水分。
3.調(diào)ph
在未調(diào)ph前,先用精密ph試紙測量培養(yǎng)基的原始ph值,如果ph偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/l naoh,邊加邊攪拌,并隨時用ph試紙測其ph值,直至ph達7.6。反之,則用1mol/l hcl進行調(diào)節(jié)。注意ph值不要調(diào)過頭,以避免回調(diào),否則,將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。
對于有些要求ph值較精-確的微生物,其ph的調(diào)節(jié)可用酸度計進行(使用方法,可參考有關(guān)說明書)。
4.過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結(jié)果的觀察。一般無特殊要求的情況下,這一步可以省去(本實驗無需過濾)。
5.分裝
按實驗要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。
分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過管高的1/5,滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝。
6.加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染,并保-證有良好的通氣性能(棉塞制作方法附本實驗后面)。
7.包扎
加塞后,將全部試管用麻繩捆扎好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后,外包牛皮紙,用麻繩以活結(jié)形式扎好,使用時容易解開,同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。
8.滅菌
將上述培養(yǎng)基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌,則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。
9.擱置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
10.無菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時,以檢查滅菌是否徹-底。