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植物克隆技術(shù)流程

發(fā)布時(shí)間:2023-10-02
克隆是英文“clone的音譯:實(shí)際上它是無性繁殖的意思,它是指利用生物的一個(gè)離體組織材料甚至是細(xì)胞也能培養(yǎng)出來新生的生物體,目前,隨著克隆羊及克隆人的順利實(shí)驗(yàn)成功,克隆技術(shù)已不在是一個(gè)神秘的話題,而我們所說的“植物克隆”實(shí)際上包括了各種無性繁殖方法,由于“植物的組織培養(yǎng)技術(shù)”較早的發(fā)展,所以,現(xiàn)在我們所說的“植物克隆”一般都是說的“植物組織培養(yǎng)技術(shù)”。自19世紀(jì)后半葉世紀(jì)“植物組織培養(yǎng)技術(shù)“提出來到現(xiàn)在,該項(xiàng)技術(shù)還一直是高校院所及大型企業(yè)才有可能完全擁有的技術(shù),并且其育苗成本也是相當(dāng)?shù)捏@人,以下就植物“組織培養(yǎng)技術(shù)”的一般流程加以描述:從以下的描述大家也可以對(duì)比一下“植物非試管快繁技術(shù)”的操作流程,比較一下它們掌握的難易性。
植物克隆技術(shù)技術(shù)是是利用離體培養(yǎng)技術(shù)在試管內(nèi)大量繁殖植物種苗的方法。它是將植株上的細(xì)胞或小塊組織在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),在短短幾個(gè)月時(shí)間內(nèi)便能繁殖出成千上萬個(gè)新的植株。植物克隆技術(shù)優(yōu)勢(shì)主要是快速、周年生產(chǎn)、變異小、無需種子繁殖等等。植物克隆工廠是指利用環(huán)境控制和自動(dòng)化高新技術(shù)進(jìn)行植物全年生產(chǎn)的體系,包括無土栽培、植物克隆等技術(shù)以及植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的工業(yè)化產(chǎn)體系。1957年世界上第一工廠誕生在丹麥到1998年,日本有用于研究、展示、生產(chǎn)的植物工廠近四十個(gè),其中生產(chǎn)用植物工廠17個(gè)。植物工廠建造雖未達(dá)到應(yīng)用普及發(fā)展的時(shí)期,但其 出現(xiàn)預(yù)示著將來的發(fā)展前景。植物克隆工廠,其生產(chǎn)采用全封閉的方式,嚴(yán)格實(shí)行全面和有效的控制環(huán)境及先進(jìn)的植物工程技術(shù),使生產(chǎn)到采收的全過程連續(xù)進(jìn)行并高度自動(dòng)化、流水化作業(yè),實(shí)現(xiàn)全年連續(xù)的生產(chǎn),完全擺脫了自然條件的限制。
植物克隆技術(shù)基本過程:
一、培養(yǎng)基的制備
1、 母液的配制和保存為減少工作量一般將各種成分配成比所需濃度高10-100被的母液,用時(shí)按比例稀釋。在配制大量元素?zé)o機(jī)鹽母液時(shí),要防止在混合各種鹽類時(shí)產(chǎn)生沉淀,為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合,同時(shí)在混合時(shí)要注意先后順序,把鈣離子、錳離子、鋇離子和硫酸根、磷酸根錯(cuò)開,以免發(fā)生作用,相互結(jié)合生成沉淀。另外在混合各種無機(jī)鹽時(shí),稀釋度要大,慢慢混合,同時(shí)邊混合邊攪拌。配制好的母液分別貼好標(biāo)簽,注明母液號(hào)、配制倍數(shù)、日期及配制1l培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)取的量。母液儲(chǔ)存于2-4℃的冰箱中。2、 培養(yǎng)基的配制 稱取規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖,加入一定量的蒸餾水,加熱使其溶解。在燒杯中加入規(guī)定量的各種母液,包括生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的特殊補(bǔ)加物。 將母液混合物加入融化的瓊脂中,再加入糖類物質(zhì),定容至所需體積,攪勻。 用1mol/l的氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)ph值。趁熱將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中。用棉塞或封口膜蓋住瓶口。在121-126℃滅菌15-20min。滅菌后,待壓力歸零后將培養(yǎng)基取出讓其凝固。
二、材料的消毒與接種1、 材料的選擇和確定不同種類的植物以及同種植物不同的器官對(duì)誘導(dǎo)條件的反應(yīng)是不一致的,因此,在取材時(shí)要充分考慮季節(jié)的影響、器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡、取材的部位以及材料的大小。
2、 材料的消毒一般材料先用自來水沖洗,再用70%的酒精浸泡數(shù)秒,倒去酒精,再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min,后用無菌水沖洗3-5次。3、 接種將材料切成所需的形狀和大小,接入培養(yǎng)基中。
三、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根與移栽
1. 初代培養(yǎng)在初代培養(yǎng)基上,外植體經(jīng)不同的途徑可以誘導(dǎo)出愈傷組織、直接分化出芽或誘導(dǎo)出胚狀體。
2、 繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上,使愈傷組織分化出叢生芽、不定芽繼續(xù)增殖、胚狀體發(fā)育成完整植株。
3、 生根將健壯的試管苗插入生根培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)根的形成。
4、 試管苗的移栽打開瓶蓋,逐漸降低濕度,并逐漸增強(qiáng)光照,進(jìn)行馴化,以適應(yīng)環(huán)境,經(jīng)過一段時(shí)間的煉苗即可移入盆中。
(來源:中國(guó)植物網(wǎng) 作者: root)
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