液相色譜柱是色譜分析中關(guān)鍵的耗材之一，色譜柱的狀態(tài)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響也是有所影響。日常分析時(shí)色譜柱的污染卻在所難免。色譜柱被污染后，通常會(huì)導(dǎo)致一系列的分析問題，比如壓力高、基線不穩(wěn)、峰型差等。此時(shí)正確的沖洗和維護(hù)色譜柱就顯得十分重要了。
一、柱體積的計(jì)算
我們在一些沖洗方法的資料中，經(jīng)常會(huì)看到10倍柱體積或者20倍柱體積的說法。那么柱體積應(yīng)該如何計(jì)算呢？我們可以把色譜柱想象為一個(gè)圓柱形，因此可以參考圓柱形計(jì)算公式。
v=πr2l
v=色譜柱體積(ml) r=色譜柱半徑(cm) l= 色譜柱長度(cm)
常規(guī)250*4.6mm的規(guī)格，柱體積經(jīng)計(jì)算為4.15ml，以1ml/min的流速10倍柱體積就是42min左右。以下是一些常見規(guī)格的柱體積值，可作為參考。
二、kromasil反相c18柱的沖洗
反相c18柱是我們?nèi)粘?shí)驗(yàn)中應(yīng)用廣泛的固定相之一，首先我們先從反相c18柱的常見情況沖洗進(jìn)行介紹，分別是：一般污染的沖洗、使用緩沖鹽后的沖洗、生物樣品分析后的沖洗。
1、一般污染的沖洗
一般污染是指的是我們每次分析使用后常見的污染情況，例如試劑和樣品雜質(zhì)對色譜柱產(chǎn)生的污染，或者是一些聚合物的形成等。
① 高比例的水相（例如：10%甲醇/乙腈-水溶液）沖洗10倍柱體積。這樣可以將殘留在色譜柱中的緩沖鹽和一些極性化合物沖洗干凈；
② 高比例的有機(jī)相（例如：80%甲醇/乙腈-水溶液）沖洗10-20倍柱體積。高比例有機(jī)相可以將一些疏水性的雜質(zhì)沖洗干凈；
③ 如果執(zhí)行上述沖洗之后還是污染問題沒有被解決，可以選擇異丙醇沖洗10-20倍柱體積。
2、使用緩沖鹽后的沖洗
流動(dòng)相中時(shí)常會(huì)加入一些緩沖鹽，這些緩沖鹽可能會(huì)在色譜柱中析出，導(dǎo)致柱壓升高等問題，影響后續(xù)使用。
① 開啟柱溫箱，高比例的水相（例如：10%甲醇/乙腈-水溶液）沖洗20倍柱體積；
② 以未加入緩沖鹽的方法起始比例流動(dòng)相進(jìn)行平衡。
3、生物樣品污染
生物分析實(shí)驗(yàn)中，通常前處理較為復(fù)雜，導(dǎo)致樣品無法處理干凈?？赡軙?huì)殘留小分子肽等物質(zhì)，其會(huì)吸附在色譜柱的管壁或者篩板上，造成柱壓高、峰型差、分離度降低等問題。
① 在流動(dòng)相的有機(jī)相中加入0.1%的三氯乙酸，以增強(qiáng)對吸附蛋白質(zhì)的洗脫；
② 如果問題仍未解決，可嘗試在色譜柱里面進(jìn)100ul三氮乙醇，嘗試清洗強(qiáng)保留的蛋白
三、kromasil色譜柱沖洗指南
關(guān)于其他常見色譜柱的沖洗方法，可按照以下提示進(jìn)行嘗試，若使用其他品牌的色譜柱請和廠商工程師確認(rèn)后進(jìn)行參考。
1、反相柱的沖洗
使用10倍柱體積的如下溶劑依次清洗
① 90%水-乙睛溶液
② 100%四氫呋喃
③ 95%乙腈-水溶液
④ 不含鹽的初始比例流動(dòng)相
⑤ 初始比例流動(dòng)相平衡
2、正相柱的沖洗-硅膠柱
使用10倍柱體積的如下溶劑依次清洗
① 異丙醇
② 甲醇
③ 乙酸乙酯
④ 流動(dòng)相
3、正相柱的沖洗-氰基柱、二元醇基柱
使用10倍柱體積的如下溶劑依次清洗
① 三氯甲烷
② 異丙醇
③ 二氯甲烷
④ 流動(dòng)相
色譜柱污染在日常分析中在所難免，因此可以考慮購買kromasil保護(hù)柱來進(jìn)行預(yù)防。kromasil保護(hù)柱采用分析柱相同填料填充，不增加死體積與不改變分離的同時(shí)，可以有效保護(hù)分析柱，延長使用壽命。
kromasil液相色譜柱開放試用中，委托分析開放報(bào)名中，詳情可咨詢當(dāng)?shù)亟?jīng)銷商或點(diǎn)擊下方“我要報(bào)名”留下您的信息，我們的技術(shù)人員將盡快與您聯(lián)系
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鯤霆生物現(xiàn)為nouryon旗下品牌kromasil液相色譜柱及制備填料中國區(qū)總代理。主營業(yè)務(wù)為代理銷售各類實(shí)驗(yàn)室精密儀器、試劑耗材以及相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)開發(fā)與咨詢服務(wù)。
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