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茶樹親環(huán)素基因cdna全長(zhǎng)的分析鑒定與原核表達(dá)

發(fā)布時(shí)間:2023-10-02
通過對(duì)茶樹新梢cdna文庫(kù)大量隨機(jī)測(cè)序,獲得了一個(gè)編碼親環(huán)素的全長(zhǎng)基因,在genbank登錄,登錄號(hào)為dq904327。茶樹親環(huán)素基因cdna全長(zhǎng)949bp,其中開放閱讀框全長(zhǎng)495bp,編碼蛋白質(zhì)含有164個(gè)氨基酸,分子量約為17.47kd,等電點(diǎn)約為8.54,它具備5’端非編碼區(qū)的“caat”標(biāo)志及3’端非編碼區(qū)的“aataaa”poly-a加尾信號(hào)。其推測(cè)的氨基酸序列經(jīng)與26條其他生物親環(huán)素蛋白氨基酸序列進(jìn)行clustal w多序列聯(lián)配并以neighbor-joining法進(jìn)行進(jìn)化樹構(gòu)建后,發(fā)現(xiàn)與水稻和小麥的相似性較高,達(dá)到85%以上。根據(jù)親環(huán)素基因開放閱讀框序列設(shè)計(jì)引物,構(gòu)建了原核表達(dá)載體pet/csin-cyp,并在大腸桿菌bl21(de3)中成功誘導(dǎo)出了一個(gè)分子量為23kd的親環(huán)素融合蛋白。完成機(jī)構(gòu):[1]中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所茶樹資源和遺傳改良與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,浙江杭州310008 [2]中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院,北京100081
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