微細毛圓線蟲探針法熒光pcr檢測試劑盒技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在real- qpcr中，對整個pcr反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在real-time qpcr擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
pcr反應(yīng)過程中產(chǎn)生的dna拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終pcr反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，pcr的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的pcr產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量pcr早稱taqman pcr，后來也叫real-time pcr，是美國pe（perkin elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)pcr基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著pcr反應(yīng)的進行，pcr反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，pcr 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 pcr 產(chǎn)物量也不能計算出起始 dna 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， pcr產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 pcr 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 ct值。
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