中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(nap)采用原理
簡介：
堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，簡稱alp或akp)是一類于哺乳動物組織內(nèi)廣泛分布的磷酸酯酶，其活性在ph 9.2~9.8范圍內(nèi)最佳。它主要存在于附睪上皮之靜纖毛、腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、肝的毛細(xì)膽管膜、微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮等物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，還可以出現(xiàn)在高爾基復(fù)合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、腸上皮之溶酶體、吞飲小泡、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。
中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(nap)采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，而不是采用金屬沉淀法來顯示其堿性磷酸酶的活性，它作用原理是在ph9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可以通過水解ab-bi磷酸鹽，從而釋放出萘酚與磷酸，前者與偶聯(lián)重氮鹽可以生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液專門用于骨髓細(xì)胞或血液涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位位于胞槳，呈藍(lán)色，結(jié)果比金屬鹽沉淀法更可靠。
儲存條件：
6個(gè)月有效。
自備材料：
1、載玻片
2、多聚甲醛（4%）
3、顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
(一)、涂片
1、通過nap固定液固定，制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片，充分水洗。
2、滴加準(zhǔn)備好的nap孵育液，孵育及水洗。
3、滴加甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。水洗、晾干后鏡檢。
(二)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、準(zhǔn)備其他容器或6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，使用pbs清洗干凈。
2、使用nap固定液或多聚甲醛進(jìn)行固定，pbs清洗。
3、滴加配制好的nap孵育液，置于濕盒內(nèi)，避光孵育，pbs清洗。
4、加入甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。使用pbs清洗后鏡檢。
關(guān)鍵詞：顯微鏡