中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
gb 31658.24-2022
食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)
動(dòng)物性食品中賽杜霉素殘留量的測定
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
national food safety standard-
determination of semduramicin residues in animal derived food by
liquid chromatography-tandem mass spectrometric method
1范圍
本文件規(guī)定了動(dòng)物性食品中賽杜霉素的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。
本文件適用于雞肌肉和肝臟組織中賽杜霉素殘留量的測定。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
gb/t 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
3術(shù)語和定義
本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。
4原理
試樣中殘留的賽杜霉素用乙腈提取，固相萃取柱凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測，外標(biāo)法定量。
5試劑和材料
除特別注明者外均為分析純試劑；水為符合gb/t 6682規(guī)定的一級水。
5.1試劑
5. 1.1乙睛(ch3cn)：色譜純。
5.1.2甲醇(ch3oh)：色譜純。
5.1.3甲酸( hcooh)：色譜純。
5. 1.4二氯甲烷(ch2cl2)。
5.2溶液配制
5.2.1 50%乙腈溶液：取乙腈50 ml，用水溶解并稀釋至100 ml，混勻。
5.2.2 80%二氯甲烷甲醇溶液：取二氯甲烷80 ml，加甲醇20 ml，混勻。
5.2.3流動(dòng)相a：取水100 ml，加甲酸0.1 ml，混勻。
5.2.4流動(dòng)相b：取乙腈100 ml，加甲酸0.1 ml，混勻。
5.3標(biāo)準(zhǔn)品
賽杜霉素(semduramicin，分子式：c45h75o16，cas號：113378-31-7)，含量≥94.3%。
5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取相當(dāng)于賽杜霉素10 mg的對照品，用乙腈溶解并定容于10 ml容量瓶中，配制成濃度為1 mg/ml的賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18℃以下保存，有效期3個(gè)月。
5.4.2 10μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1ml于10ml容量瓶中，用50%乙腈水溶液稀釋至刻度，配制成10μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液。2℃~8℃保存，有效期1個(gè)月。
5.4.3 1μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取10μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液1.0ml于10ml容量瓶中，用50%乙腈水溶液稀釋至刻度，配制成1μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液。2℃~8℃保存，有效期1個(gè)月。
5.5材料
5.5.1固相萃取柱：石墨化碳黑氨基固相萃取柱：500mg/6ml。
5.5.2濾膜：有機(jī)相，0.22μm。
6儀器和設(shè)備
6.1超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源。
6.2分析天平：感量0.01 g和0.00001 g。
6.3高速離心機(jī)。
6.4渦旋混合器。
6.5水平振蕩器。
6.6均質(zhì)機(jī)。
6.7固相萃取裝置。
6.8氮吹儀。
7試樣的制備與保存
7.1試樣制備
取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并均質(zhì)。
a)取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試樣；
b)取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試樣；
c)取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試樣。
7.2試樣保存
-20℃以下保存。
8測定步驟
8.1提取
取試料2 g(準(zhǔn)確至±0.05 g)，于50 ml離心管內(nèi)，加乙腈12 ml，渦旋混勻1 min，振蕩10 min，5 0000 r/min離心5 min(肝臟8 000 r/min)，取上清液，加乙腈12 ml重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，備用。
8.2凈化
萃取柱依次用二氯甲烷5 ml和乙腈5 ml活化，取備用液，過柱，控制流速2 ml/min~3 ml/ min。抽干10 min，用80%二氯甲烷甲醇溶液6 ml洗脫，收集洗脫液，40℃水浴中氮?dú)獯蹈伞Ｓ?0%乙腈水溶液溶解并稀釋至2.0ml，過濾，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。
8.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
精密量取1μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液20μl、40μl和100μl，10μg/ml賽杜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液20μl、100μl和200μl，分別加入6份按提取和凈化處理的空白試料殘?jiān)?，?0%乙腈水溶液溶解并稀釋至2 ml，配制成濃度為10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml和1 000 ng/ ml的基質(zhì)匹配系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃10000r/min離心10min，取上清液，濾膜過濾，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。以測得特征離子色譜峰面積為縱坐標(biāo)，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。
8.4測定
8.4.1色譜參考條件
a)色譜柱：c18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)，或相當(dāng)者；
b)流動(dòng)相：a為0.1%甲酸溶液，b為0. 1%甲酸乙腈溶液；
c)梯度洗脫：梯度洗脫程序見表1；
d)流速：0.3 ml/min；
e)柱溫：30℃；
f)進(jìn)樣量：10μl。
8.4.2質(zhì)譜參考條件
a)離子源：電噴霧離子源；
b)掃描方式：正離子掃描；
c)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；
d)電離電壓：3.0 kv；
e)源溫：100℃；
f)霧化溫度：350℃；
g)錐孔氣流速：20 l/h；
h)霧化氣流速：600 l/h；
i)測試藥物定性離子對、定量離子對、錐孔電壓和碰撞能量的參考值見表2。
8.5測定法
取試料溶液和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，外標(biāo)法計(jì)算。基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液及試料溶液中賽杜霉素的特征離子質(zhì)量色譜峰面積均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。試樣溶液中的相對離子豐度與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中的相對離子豐度相比，符合表3的要求。標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄a。
8.6空白試驗(yàn)
取空白試料，除不加藥物外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。
9結(jié)果計(jì)算和表述
試樣中賽杜霉素的殘留量按公式(1)計(jì)算。
式中：
x——試樣中賽杜霉素殘留量的數(shù)值，單位為微克每千克(μg/kg)；
cs——標(biāo)準(zhǔn)溶液中賽杜霉素濃度的數(shù)值，單位為微克每升(μg/l)；
a——試樣溶液中賽杜霉素的峰面積；
as——標(biāo)準(zhǔn)溶液中賽杜霉素的峰面積；
v——試樣溶液濃縮后定容體積的數(shù)值，單位為毫升(ml)；
m——試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g)。
10檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度
10.1靈敏度
本方法的檢測限為3μg/kg，定量限為10μg/kg。
10. 2準(zhǔn)確度
本方法在10μg/kg~400μg/kg添加濃度水平上的回收率為70%~ 120%。
10.3精密度
本方法批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤20%，批間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤20%。