大鼠elisa酶聯(lián)免疫試劑盒在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是elisa雙抗體夾心法及elisa間接法。
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05m ph9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2m硫酸0.05ml。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1. 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。
2. 次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用ddw(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3. 大鼠elisa酶聯(lián)免疫試劑盒加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2m硫酸0.05ml。
lcat 磷酸化膜相關(guān)蛋白*激酶lyn抗體
l-citrulline 磷酸化膜相關(guān)蛋白numb抗體
lck/p56-lck 磷酸化酶激酶γ2
ldh/ldha 磷酸化酶激酶γ1
ldha 磷酸化酶β抗體
ldhc/cancer,testis antigen 32 磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體
ldl 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體
ldl receptor/ldl-r 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體
lef-1 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體
legumain 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體
大鼠elisa酶聯(lián)免疫試劑盒