一，動態(tài)顯色法原理
革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素催化了lal中酶原的活化 。初始活化速率由內(nèi)毒素的濃度決定?；罨蟮拿复呋藷o色底物 ac-lle-glu-ala-arg-pna釋放出pna。在整個孵育過程中，用光度法連續(xù)測量405nm處的游離pna。通過將其反應(yīng)時間與標準曲線比較，計算出樣品中的內(nèi)毒素濃度。
酶原內(nèi)毒素凝固酶
底物 + h2o酶肽肽 + pna
二，動態(tài)濁度法原理
濁度法是通過檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化來檢測內(nèi)毒素含量的鱟試驗法。動態(tài)濁度法是檢測反應(yīng)混合物的濁度到達某一預(yù)先設(shè)定的吸光度或透光率所需要的反應(yīng)時間，或是檢測濁度增加速度的方法。隨著凝膠的形成，反應(yīng)液吸光值的增加、od值增加速率和內(nèi)毒素的濃度呈正相關(guān)。
三，光度法檢測所需主要設(shè)備、材料
試劑
– 鱟試劑（lal）（kinetic-qcl™ 或 pyrogent™-5000 試劑）
– 內(nèi)毒素工作標準品 (cse)
– lal溶解緩沖液（用于pyrogent™-5000動態(tài)濁度法lal 試驗）
– lal 試劑檢查用水（即lrw）(# w50-640, w50-100, w50-500)
器具
– 玻璃稀釋管(# n207)
– 獨立包裝的血清吸管（選購）
– 標簽
– 96-微孔板 (# 25-340)
– 試劑槽(# 00190035)
請使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具。
設(shè)備和軟件
– 八道移液器
– 光吸收酶標儀
– winkqcl™軟件
– 移液器
– 計時器
– 漩渦混合器
四，操作步驟
本指南分步描述了如何進行傳統(tǒng)動態(tài)法鱟試劑（以下簡稱lal）試驗。試驗開始前，先使試劑瓶溫度與室溫相同。還應(yīng)打開孵育酶標儀，并在winkqcl軟件中創(chuàng)建微孔板模板。
五，注意事項
– 使用配套的lal和 cse 試劑
– 建議勿使用塑膠管稀釋內(nèi)毒素
– 遵循所有關(guān)于內(nèi)毒素漩渦震蕩次數(shù)的建議
– 使用經(jīng)內(nèi)毒素試驗驗證合格的無熱原器具
– 使用前，先使試劑溫度與室溫保持相同
– 不要對lal進行漩渦震蕩
– 將試劑放入96-微孔板的孔中時，避免產(chǎn)生氣泡
– 不要污染樣品、標準品、lrw 和器具
– 應(yīng)正確安裝、驗證并維護設(shè)備儀器
瑋馳相關(guān)產(chǎn)品
設(shè)備、軟件
品牌
貨號
名稱
lonza
25-315s
lonza內(nèi)毒素專用檢測酶標儀，包含顯色法、濁度法
lonza
25-611
符合fda part 11認證的軟件winkqcl, 也包含一個儀器許可證
動態(tài)顯色法lal試劑盒
品牌
貨號
名稱
規(guī)格
靈敏度(eu/ml)
lonza
50-650u
kinetic-qcl 動態(tài)顯色法lal試劑盒
192次測試，8×24 測試/瓶溶解物，2瓶內(nèi)毒素
3×30 ml/瓶lal試劑檢查用水
0.005至50
lonza
50-650nv
kinetic-qcl™ 動態(tài)顯色法lal試劑盒
2,040次測試，85×24 測試/瓶溶解物，15瓶內(nèi)毒素
0.005至50
lonza
50-650h
kinetic-qcl™ 動態(tài)顯色法lal試劑盒
2,400次測試，100×24 測試/瓶溶解物，10瓶內(nèi)毒素
0.005至50
lonza
k50-643l
kinetic-qcl™ 動態(tài)顯色法lal試劑盒
600次測試，25×24 測試/瓶溶解物
0.005至50
lonza
k50-643u
kinetic-qcl™ 動態(tài)顯色法lal試劑盒
2400次測試，100×24 測試/瓶溶解物
0.005至50
動態(tài)濁度法lal試劑盒
品牌
貨號
名稱
規(guī)格
靈敏度(eu/ml)
lonza
n383
pyrogent™-5000動態(tài)濁度lal試劑盒
100次測試，2×50測試/瓶溶解物，2瓶重組緩沖液，1瓶內(nèi)毒素
0.01至100
lonza
n384
pyrogent™-5000動態(tài)濁度lal試劑盒
200次測試，2×100測試/瓶溶解物，2瓶重組緩沖液，1瓶內(nèi)毒素
0.01至100
lonza
n588
pyrogent™-5000動態(tài)濁度lal試劑盒
2,250次測試，45×50測試/瓶溶解物，45瓶重組緩沖液，10瓶內(nèi)毒素
0.01至100
lonza
n688
pyrogent™-5000動態(tài)濁度lal試劑盒
4,500次測試，45×100測試/瓶溶解物，45瓶重組緩沖液，10瓶內(nèi)毒素
0.01至100
無熱原吸頭
品牌
貨號
名稱
規(guī)格
lonza
be25-415
eppendorf® 2-200μl biopur™ 移液管吸頭
<0.001 eu/ml，5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤
lonza
be25-416
eppendorf® 2-300μl biopur™ 移液管吸頭
<0.001 eu/ml，多通道移液器，5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤
lonza
be25-417
eppendorf® 50-1000μl biopur™ 移液管吸頭
<0.001 eu/ml，5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤
lal試劑檢查用水
品牌
貨號
名稱
規(guī)格
lonza
w50-640
lal試劑檢查用水
<0.005 eu/ml,30 ml/瓶
lonza
w50-100
lal試劑檢查用水
<0.005 eu/ml,100 ml/瓶
lonza
w50-500
lal試劑檢查用水
<0.005 eu/ml,500 ml/瓶
lonza
w50-1000
lal試劑檢查用水
<0.005 eu/ml,1000 ml/瓶
無熱原96孔板
品牌
貨號
名稱
規(guī)格
lonza
25-340
無熱原96孔板
內(nèi)毒素測試<0.0005eu/孔，50/箱
無熱原試管
品牌
貨號
名稱
規(guī)格
lonza
n207
無熱原試管
30/鋁箔包
lonza
n201
無熱原試管
50/箱
lonza
n205
無熱原試管
50/鋁箔包