醋酸鉛培養(yǎng)基的檢驗(yàn)原理與使用方法及應(yīng)用研究！
一、背景
醋酸鉛培養(yǎng)基用于細(xì)菌的硫化氫試驗(yàn)，成分(g/l)：蛋白胨：10.0；牛肉浸粉：3.0；氯化鈉：5.0；硫代硫酸鈉：2.5；瓊脂：12.0；ph值7.3±0.1，25℃。
原理：細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛或亞鐵離子則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。此試驗(yàn)可間接檢測(cè)細(xì)菌是否產(chǎn)生硫化氫。
用法：稱取本品32.5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝三角瓶，每瓶100ml，115℃高壓滅菌15分鐘，冷至50℃左右時(shí)，加入過(guò)濾除菌的10%醋酸鉛溶液1ml，混勻，分裝試管，每管約3-4ml，冷卻，備用。
檢測(cè)結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?br>醋酸鉛培養(yǎng)基主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬、愛(ài)德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌，絕大多數(shù)硫化氫陽(yáng)性，其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。
腸桿菌科包括無(wú)芽孢、周身鞭毛或無(wú)鞭毛的革蘭氏染色陰性直桿菌。
化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)，兼營(yíng)呼吸代謝和發(fā)酵代謝；可通過(guò)氧化多種簡(jiǎn)單有機(jī)化合物或發(fā)酵糖、有機(jī)酸或多元醇來(lái)獲取能量；大部分能在含有一種碳源的無(wú)機(jī)氮培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；有些種生長(zhǎng)時(shí)需要某種氨基酸或水溶性維生素；除個(gè)別血清型外，接觸酶均為陽(yáng)性，氧化酶陰性；除歐文氏菌屬中的少數(shù)種外，均還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；dna（脫氧核糖核酸）中的g+c（鳥(niǎo)嘌呤和胞嘧啶）克分子含量為39～59%。
二、應(yīng)用
用于釀酒酵母硫化氫合成的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究：
采用rna-seq技術(shù)對(duì)釀酒酵母不同發(fā)酵時(shí)期的基因轉(zhuǎn)錄特征進(jìn)行研究,篩選與h2s合成相關(guān)的差異表達(dá)基因,為揭示釀酒酵母產(chǎn)h2s的分子機(jī)制及為優(yōu)良釀酒酵母的選育提供理論依據(jù),對(duì)改善葡萄酒的風(fēng)味和感官品質(zhì)具有重要意義。
研究得到了以下主要結(jié)果：
1、采用biggy瓊脂和triple m模擬汁發(fā)酵對(duì)181株釀酒酵母的產(chǎn)h2s特性進(jìn)行了研究。（1）根據(jù)菌株在biggy瓊脂上形成的菌落顏色,發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)室篩選的181株釀酒酵母中有119株高產(chǎn)h2s菌株、48株中產(chǎn)h2s菌株、9株低產(chǎn)h2s菌株、5株不產(chǎn)h2s菌株。
（2）從這181株菌中篩選19株菌進(jìn)行triple m模擬汁發(fā)酵,并以u(píng)cd932和ucd522為對(duì)照,根據(jù)菌株在triple m模擬汁發(fā)酵中h2s總產(chǎn)量的不同,將這21株酵母菌分為不產(chǎn)（0-1 ppm）、低產(chǎn)（1-200 ppm）、中產(chǎn)（200-1000 ppm）和高產(chǎn)h2s菌株（>1000 ppm）四個(gè)等級(jí)。其中,不產(chǎn)h2s的菌株共4株,分別為112y4,ucd932,112y14,174y1;低產(chǎn)h2s的菌株共5株,分別為lfp515,lfp506,44y2,lfp525-4,lfp525;中產(chǎn)h2s的菌株共8株,分別為ucd522,lfn520,lfn524-6+lfp525-4,lfn524,lfn511,32y15,31y3,31y9;高產(chǎn)h2s的菌株共4株,分別為lfn524-4,lfp525-2,lfn524-6,32y12。
2、采用50se策略,通過(guò)illuminahiseq 2000對(duì)不產(chǎn)h2s菌株112y4和高產(chǎn)h2s菌株32y12在triple m模擬汁發(fā)酵第40 h（產(chǎn)h2s前期,樣品編號(hào)為112y4-ⅰ和32y12-?。?、88 h（產(chǎn)h2s時(shí)期,樣品編號(hào)為112y4-ⅱ和32y12-ⅱ）和160 h（產(chǎn)h2s末期,樣品編號(hào)為112y4-ⅲ和32y12-ⅲ）三個(gè)不同發(fā)酵時(shí)期的18個(gè)樣品進(jìn)行了rna-seq測(cè)序。（1）獲得了大量高質(zhì)量的數(shù)據(jù),所有樣品的clean reads都超過(guò)5800000,且所有樣品與參考基因的總比對(duì)率都超過(guò)76%,其中比對(duì)率（unique match）都超過(guò)71%;與參考基因組的總比對(duì)率都超過(guò)94%,其中比對(duì)率都超過(guò)84%。
（2）對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行測(cè)序質(zhì)量評(píng)估、測(cè)序飽和度分析、測(cè)序隨機(jī)性分析及基因覆蓋度分析等發(fā)現(xiàn)所有樣品的測(cè)序隨機(jī)性好,測(cè)序深度都達(dá)到了后續(xù)生物信息學(xué)分析的要求。
（3）將clean reads分別與s288c參考基因組匹配,在參考基因組的6500個(gè)基因中,這18個(gè)樣品的轉(zhuǎn)錄組中能檢測(cè)到的表達(dá)基因數(shù)都超過(guò)5649個(gè)。
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