鉆石玫瑰（rosasp.），薔薇科薔薇屬多年生花卉，為微型月季的一種，因其花枝短小,花朵如豆扣般大小,故美其名曰“鉆石玫瑰”或“袖珍玫瑰”。鉆石玫瑰除具有一般月季花容秀美、芳香馥郁、四季常開等特點外,還具有分枝多、株型矮小緊湊、耐寒、耐熱、適應性強等優(yōu)點,是現(xiàn)代城市綠化不可替代的材料，深受人們的喜愛[1]。目前鉆石玫瑰主要靠扦插繁殖,繁殖率低、速度慢,且后代出現(xiàn)品質(zhì)降低現(xiàn)象，遠遠不能滿足市場的需求。為此,我們開展了鉆石玫瑰組培快繁技術研究,擬用工廠化育苗措施解決常規(guī)生產(chǎn)所面臨的問題。
1材料與方法
1.1外植體的建立
供試材料采自重慶市園林綠化科學研究所品種圃從北京引進已栽培馴化2年的鉆石玫瑰品種“紫色時代”當年生植株。
剪取優(yōu)良健壯株當年生枝條中段帶側芽的未木質(zhì)化或半木質(zhì)化莖段,用毛刷蘸肥皂水輕輕刷洗后流水沖洗1～2h,再剪成1.0～1.5cm左右?guī)б秆康那o段;超凈臺上，將莖段先用70%酒精溶液浸泡30s,無菌水沖洗2～3次，再置于0.1%升汞溶液中消毒9～12min,然后用無菌水沖洗3～4次,以備接種。
1.2離體芽的誘導培養(yǎng)
將無菌莖段接種于誘導培養(yǎng)基上誘導萌芽。誘導培養(yǎng)基以ms為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的細胞分裂素6-ba和生長素naa，共組成5種培養(yǎng)基：ms+6-ba0.30mg/l+naa0.10mg/l,ms+6-ba0.50mg/l+naa0.10mg/l,ms+6-ba0.50mg/l+naa0.20mg/l,ms+6-ba1.0mg/l+naa0.20mg/l,ms+6-ba2.00mg/l+naa0.10mg/l。每種培養(yǎng)基均接種20個離體芽,培養(yǎng)6周后統(tǒng)計芽誘導分化率（見表1）。
1.3叢生芽的繼代增殖培養(yǎng)
將誘導培養(yǎng)基上已萌發(fā)的嫩芽切下轉接到4種繼代培養(yǎng)基中繼代增殖。繼代培養(yǎng)基分別ms+6-ba0.50mg/l+naa0.10mg/l,ms+6-ba1.00mg/l+naa0.10mg/l,ms+6-ba1.00mg/l+naa0.20mg/l，ms+6-ba2.00mg/l+naa0.20mg/l。每種培養(yǎng)基接種30個嫩芽,接種時單芽莖段長0.5～1.0cm左右,培養(yǎng)3周后統(tǒng)計叢生芽的數(shù)量以及高于2cm的芽數(shù)（見表2）。
1.4試管苗的生根培養(yǎng)
選取繼代培養(yǎng)中生長健壯的叢生芽,剪成1.2～1.5cm長的單芽莖段，轉接到生根培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基配方為：1/2ms+naa0.10mg/l，1/2ms+iba0.1mg/l，1/2ms+naa0.20mg/l，1/2ms+iba0.20mg/l，1/2ms+naa0.50mg/l，1/2ms+iba0.50mg/l。每種培養(yǎng)基接種30個莖段，接種15天后統(tǒng)計幼苗生根情況（見表3）。
以上ms培養(yǎng)基中的白砂糖濃度均為30.0g/l，1/2ms培養(yǎng)基中白砂糖濃度為20.0g/l，瓊脂均為3.5g/l,ph5.8，培養(yǎng)室溫度23（±2）℃,光照強度2000～2500lx，光照時間10～12h/d。
2結果與分析
2.1離體芽的誘導結果
鉆石玫瑰離體芽的誘導較慢,接種4周后離體芽才開始萌動，但芽萌動后的生長情況因培養(yǎng)基內(nèi)激素濃度的不同而不同。由表1可知，ms+6-ba0.30mg+naa0.10mg/l培養(yǎng)基叢生芽少,由于6-ba濃度太低，芽分化相對較差，分化率為70%,但叢生芽在培養(yǎng)基中生長健壯；在ms+6-ba1.00mg/l+naa0.20mg/l培養(yǎng)基上,叢生芽相對較少,芽分化率為105%,且叢生芽生長細弱，說明該培養(yǎng)基中6-ba和naa濃度配比不當；在ms+6-ba2.00mg/l+naa0.10mg/l培養(yǎng)由于6-ba濃度過高,離體芽萌動后僅產(chǎn)生愈傷組織,未分化出叢生芽；ms+6-ba0.50mg/l+naa0.10mg/l和ms+6-ba0.50mg/l+naa0.20mg/l兩種培養(yǎng)基上,20個離體芽分化出的叢生芽分別為49個和39個，分化率分別達245%和195%,且叢生芽生長健壯。重復試驗，篩選出適宜離體芽誘導的培養(yǎng)基為ms+6-ba0.50mg/l+naa0.10～0.20mg/l。
2.2叢生芽的繼代增殖結果
從表2可以看出，鉆石玫瑰在所采用的4種繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)3周后，芽的增殖倍數(shù)和大于2cm芽的比率存在差異。其中：ms+6-ba1.00mg/l+naa0.10mg/l和ms+6-ba1.00mg/l+naa0.20mg/l兩種培養(yǎng)基上，增殖的叢生芽多，且芽生長健壯，芽的增殖倍數(shù)分別為5.67倍和5.2倍，大于2cm的芽占75.29%和71.79%，明顯高于其它培養(yǎng)基；在ms+6-ba0.50mg/l+naa0.10mg/l培養(yǎng)基上，芽生長細弱，叢生芽少，增殖倍數(shù)僅為2.1倍，大于2cm的芽占18.75%；ms+6-ba2.00mg/l+naa0.20mg/l培養(yǎng)基由于6-ba濃度過高，繼代芽產(chǎn)生愈傷組織后停止生長分化。重復試驗，篩選出適宜鉆石玫瑰繼代增殖的培養(yǎng)基為ms+6-ba1.00mg/l+naa0.10～0.20mg/l。
2.3試管苗生根培養(yǎng)結果
從表3看出，鉆石玫瑰在所用的6種培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天后統(tǒng)計結果，試管苗的生根率為13.3%～90%，生根數(shù)為4～243根，平均根長為0.26～1.5cm。在1/2ms+naa0.20mg/l、1/2ms+naa0.50mg/l、1/2ms+ib0.20mg/l、1/2ms+iba0.50mg/l培養(yǎng)基上，試管苗10d開始生根,生根率分別為60%、23.3%、13.3%和30%，根數(shù)分別為90根、14根、4根和27根，平均根長分別為0.35cm、0.26cm、0.6cm和0.45cm，且由于生長素濃度過高，15d后根均變成深褐色，停止生長后慢慢死亡。在1/2ms+iba0.10mg/l和1/2ms+naa0.10mg/l培養(yǎng)基上，培養(yǎng)9d開始生根,根系發(fā)達,發(fā)育良好,生根率達63.3%和90%,平均根數(shù)8根和9根,平均根長1.1cm和1.5cm，均明顯高于上述4種培養(yǎng)基，且小苗和根長勢均良好。重復試驗，在設計的6種培養(yǎng)基中,1/2ms+naa0.10mg/l培養(yǎng)基上生根最好。
2.4生根試管苗的馴化移栽
將生根試管苗放在室外光線明亮的地方，閉瓶煉苗2～3d，再逐漸開瓶煉苗2～3d，讓植株經(jīng)受試管外環(huán)境的鍛煉后取出試管苗洗凈基部粘附的培養(yǎng)基，移植于珍珠巖：腐殖土：爐雜為1：3：3的基質(zhì)中，澆濃度為0.8g/kg多菌靈溶液，遮蔭保濕，空氣濕度保持在60%～70%，當植株萌發(fā)新根后讓其逐漸見光，并降低濕度，直至暴露在外界條件下，移栽成活率可達75%～80%。
3小結與討論
3.1細胞分裂素6-ba和生長素naa作為外源激素加入培養(yǎng)基后,對鉆石玫瑰離體芽的誘導及分化影響十分顯著。適宜鉆石玫瑰離體芽誘導的培養(yǎng)基為：ms+6-ba0.50mg/l+naa0.10～0.20mg/l；最佳繼代增殖培養(yǎng)基為ms+6-ba1.00mg/l+naa0.10～0.20mg/l。
3.2鉆石玫瑰在試管內(nèi)生根需較低濃度的生長素naa和iba，當naa或iba大于2.0mg/l時，鉆石玫瑰雖能產(chǎn)生根,但根隨即變褐停止生長后死亡。試驗結果表明，誘導鉆石玫瑰試管苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2ms+naa0.10mg/l，生根率可達90%。
3.3用組織培養(yǎng)方法可以提高鉆石玫瑰的繁殖速度，且植株根系發(fā)達，苗木生長健壯、整齊,是批量繁殖鉆石玫瑰商品苗的一種好方法。