通用名：雞傳染性喉氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：test kit for antibodies to avian infectious laryngotracheitis(elisa)
【包裝規(guī)格】 96t×1/盒
【預(yù)期用途】雞傳染性喉氣管炎是由傳染性喉氣管炎病毒(avian infectious laryngotracheitis， ailt)引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的you效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性喉氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評估雞群感染ailt的風(fēng)險程度；了解雛雞母源抗體水平，為ailt免疫程序的制定提供參考。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被雞傳染性喉氣管炎病毒重組n蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法（elisa）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒抗體。實驗時，在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢血清，再加入hrp標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性喉氣管炎病毒的抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；在孔中加底物液tmb，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性喉氣管炎病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號
名稱
規(guī)格/96t×1
1
微孔酶標(biāo)板
96孔
2
陰性對照
0.3ml
3
陽性對照
0.3ml
4
*
6ml
5
檢測抗體-hrp
10ml
6
20×洗滌緩沖液
25ml
7
底物a
6ml
8
底物b
6ml
9
終止液
6ml
10
封板膜
2張
11
說明書
1份
12
自封袋
1個
13
微孔酶標(biāo)板
96孔
【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。
2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入待測樣本50μl，空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標(biāo)記的檢測抗體100μl，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μl），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔依次加底物液a、底物液b各50μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μl，15min內(nèi)，于450nm波長處測定各孔吸光值（a值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.2，陽性對照≥0.8。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.c.o（臨界值）=0.25+陰性對照孔均值。
2.未曾免疫雞群：樣品a值≥c.o為陽性；樣品a值＜c.o為陰性。
3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時的抗體水平，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒igg抗體，根據(jù)a值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響od值。
7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
9.不同批號試劑組分不得混用。