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ELISA試驗操作中留意事項總結(jié)

發(fā)布時間:2024-05-08
因為 elisa(酶聯(lián)免疫試驗)具有靈敏度較高、特異性好的特色,在科研范疇遭到廣泛喜愛。雖然洗板僅僅elisa試劑盒試驗重要環(huán)節(jié)中的一個,但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家,我們有必要對影響elisa試驗成果各要素有一定的知道。的試劑 ,良好的儀器和正確的操作是確保elisa 檢測成果牢靠的必要條件。如不留意,就易呈現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔成果正常,而標(biāo)本孔的od值卻顯著偏高)是各個廠家洗板機(jī)調(diào)試中常常遇到的問題?,F(xiàn)將elisa試驗操作中留意事項總結(jié)如下,以期給大家?guī)硪恍﹩l(fā)。
標(biāo)本及收集、貯運(yùn)要素
嚴(yán)峻溶血 ,以 hrp 為符號的elisa 測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色形成假陽性; 混有紅細(xì)胞的血清 易沉積或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有 細(xì)菌污染 ,菌體中或許含有內(nèi)源性hrp,也會發(fā)生假陽性反應(yīng); 標(biāo)本凝結(jié)不全 ,有時為了爭取時刻快速檢測,常在血液還未開端凝結(jié)時即強(qiáng)行離心別離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在elisa測定過程中能夠形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性成果; 采血試管洗刷不* 、重復(fù)運(yùn)用易穿插污染; 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ,樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降形成假陰性。
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血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測,嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在 5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時刻過長導(dǎo)致血清igg 聚合,使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免發(fā)生氣泡?;鞚峄蛴谐练e的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。重復(fù)凍融會使 抗體 效價跌落,所以測 抗體 的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測,宜少數(shù)分裝冰存;應(yīng)該運(yùn)用一次性玻璃試管或真空管*;并運(yùn)用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會添加od值,或許與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶符號物不易洗脫有關(guān);edta、酶抑制劑(如nan3)可抑制elisa體系中辣根過氧化物酶活性;血液標(biāo)本收集后有必要使其充分凝結(jié)后再別離血清,或標(biāo)本收集時用帶別離膠的*或于*中加入恰當(dāng)?shù)拇倌齽?br>
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