1、一抗選擇要點(diǎn)
(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱(chēng)為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低;而多克隆抗體特異性稍弱,抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等有所避免)。
(2)種屬來(lái)源。一般家兔來(lái)源的抗體多是多克??;而小鼠來(lái)源的抗體多是單克隆,但也有另外。這條主要要與后面的二抗來(lái)源相匹配。
(3)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測(cè)什么種屬的抗原,即species reactivity。這一點(diǎn)很重要,一般說(shuō)明書(shū)上都有注明,如小鼠ms、大鼠rat、人hum等等。
(4)能否做免疫組化。一般一抗說(shuō)明書(shū)都會(huì)注明做wb、ihc、icc、if等,建議選擇注明的抗體,因?yàn)橐话愣际墙?jīng)過(guò)文章證明。
(5)檢測(cè)標(biāo)本類(lèi)型。用于檢測(cè)石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,可能都可以用來(lái)檢測(cè)冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測(cè)石蠟切片中的抗原。
(6)生產(chǎn)廠(chǎng)家。國(guó)外抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒(méi)問(wèn)題,但有點(diǎn)貴;而國(guó)內(nèi)分裝廠(chǎng)家用的一抗工作液,價(jià)格便宜,但有時(shí)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差,尤其不同批次重復(fù)性較差。
(7)價(jià)格與質(zhì)量的矛盾。一抗原裝質(zhì)量可能會(huì)好點(diǎn),因?yàn)樵S多一抗避免反復(fù)凍融,且在稀釋液中穩(wěn)定性較差(若時(shí)間長(zhǎng)),但價(jià)格較貴。
2、二抗選擇要點(diǎn)
(1)種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)二抗來(lái)源,如一抗是小鼠來(lái)源,那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)標(biāo)記物的選擇。有hrp、biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般sp三步法二抗選擇biotin標(biāo)記的二抗,以與后面的sp結(jié)合反應(yīng);而免疫熒光染色就需要購(gòu)買(mǎi)不同熒光素標(biāo)記的二抗,如羅丹明、fitc、cy3等常用熒光素。這主要與后面有無(wú)三抗和三抗種類(lèi)有關(guān)。
(3)選擇igm還是igg。一般一抗是igm,那么二抗就選擇igm;反之,一抗是igg,則二抗選擇igg。