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實驗中使用血清時碰到的這些問題該如何解決

發(fā)布時間:2024-05-07
想要讓科技有更大的進步就需要不斷的做實驗,這樣才會有進展。而血清是實驗中常用到的材料,但是不能讓血清受到任何不好的影響,不然就會對實驗造成不小的影響,讓實驗數(shù)據(jù)不準確。那血清在使用時容易碰到那些問題,該如何解決?
1、實驗室如何選擇適合的血清?
國內(nèi)一致認為hyclone的血清是較好的,不過國外一般認為gibco比hyclone好,所以并不是價格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國內(nèi)hyclone,gibco并沒有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以一定要會辨別真?zhèn)巍?br>2、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。
我們建議血清應(yīng)保存在-2o℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
3、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
6、細胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的ph值偏高,不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
7、 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持佳ph值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的好時機,細胞切勿生長過老。
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