cell counting kit-8 (cck-8) 細胞增殖與活性檢測試劑盒是百螢生物生產(chǎn)的一種基于 sst-8 的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 sst-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2h-四唑單鈉鹽)。wst-8在電子耦合載體1-methoxy pms存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（formazan），顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm波長處測定od值，間接反映活細胞數(shù)量。
1.cck-8試劑盒和mtt試劑盒有什么區(qū)別？
答：cck-8試劑盒和mtt試劑盒都是用于測量細胞活力的方法，但cck-8試劑盒有以下優(yōu)勢：
（1）cck-8試劑盒使用的wst-8比mtt更易被細胞還原，因此靈敏度更高，檢測時間更短；
（2）cck-8試劑盒生成的甲臜產(chǎn)物是水溶性的，不需要添加有機溶劑或者洗滌細胞，操作更簡單方便；
（3）cck-8試劑盒對細胞毒性更小，不會影響細胞的正常生長和功能。
2.cck-8的工作原理是什么？
答：cck-8試劑盒中的wst-8可以被活細胞中的代謝產(chǎn)物還原為可溶性的形式。還原后的wst-8在存在電子耦合劑的條件下形成一種有色產(chǎn)物，其吸光度與細胞數(shù)量和代謝活性相關。通過測量吸光度的變化，可以間接評估細胞的增殖能力或毒性。
3. cck的保存和穩(wěn)定性如何？
答：cck穩(wěn)定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經(jīng)常使用建議4℃保存，避免反復凍融。cck正常顏色為粉紅色，若顏色發(fā)生明顯偏差，質(zhì)量可能有發(fā)生變化。
4.cck的細胞毒性如何？
答：cck毒性非常低，因此cck檢測完后相同的細胞還能用于其它細胞增殖檢測如結晶紫染色法，中性紅染色法或dna熒光染色法。
5.cck會對活細胞進行染色嗎？
答：不會，首先wst-8不會進入細胞染色，整個顯色反應都是在培養(yǎng)體系中進行的。另外wst和wst-8甲臜都屬于高度水溶性組分，反應結束更換新的培養(yǎng)液，即可外源組分。
6.做細胞活性檢測時，每孔應該接種多少個細胞？
答：當使用標準96孔板時，貼壁細胞的小接種量至少為1,000個/孔(100 μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100 μl培養(yǎng)基)。
7.若是使用6孔或者24孔板進行試驗，cck試劑使用量怎么樣呢？
答：如果要使用6孔板或24孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入cck溶液。
8.能否用384孔板進行細胞增殖與活性檢測的實驗呢？
答：可以，cck-8產(chǎn)品的使用量為每孔培養(yǎng)基總體積的10%。建議先將cck-8產(chǎn)品稀釋一倍，然后加入培養(yǎng)基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。
9.培養(yǎng)基的本底顏色如酚紅會不會影響細胞活性的檢測呢？
答：不會的，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不會對檢測造成影響。
10.在加入cck-8時可否不更換培養(yǎng)基？
答：一般情況下可以不更換培養(yǎng)基。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質(zhì)的話，有可能會產(chǎn)生誤差，必須更換其它培養(yǎng)基。
11.只可以在450 nm波長處測od值嗎？
答：可以在450 nm波長處測od值，但是若無此波長的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度高。
12.若是暫不檢測od值，該如何處理？
答：若暫時不測定od值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 m的hcl溶液或者1% w/v sds溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化
關鍵詞：酶標儀