背景介紹：
羥脯氨酸（hydroxyproline，hyp）是蛋白質(zhì)和多肽前體的重要組成部分，是一種游離氨基酸，在體內(nèi)沒(méi)有代謝途徑，主要以原型經(jīng)尿排出，其生理功能與賴氨酸類似，都是構(gòu)成氨基酸的一種重要成分。羥脯氨酸在體內(nèi)具有多種生物學(xué)功能，與體內(nèi)許多重要的生理活動(dòng)和病理變化密切相關(guān)，在哺乳動(dòng)物中，它僅存在于膠原蛋白和彈性蛋白中，但在植物中，許多蛋白質(zhì)都含有羥脯氨酸。人體中含有大量羥脯氨酸，它既是合成蛋白質(zhì)的原料，又是合成抗體和細(xì)胞因子等物質(zhì)的前體，多種疾病如腫瘤、炎癥等都會(huì)影響膠原蛋白更新，并可能導(dǎo)致血清或尿液羥脯氨酸升高。
羥脯氨酸檢測(cè)在肺纖維化中的應(yīng)用：
各項(xiàng)研究指示，膠原蛋白的過(guò)度沉積是纖維化疾病的主要特征，而羥脯氨酸（hyp）作為膠原蛋白所有的一種氨基酸，其含量約占膠原蛋白總氨基酸的13%，因此，采用比色法、 hplc等生化方法測(cè)定組織中羥脯氨酸的總含量逐漸成為纖維化嚴(yán)重程度評(píng)價(jià)常用的方法學(xué)，在2017年該方法學(xué)更是被美國(guó)胸科協(xié)會(huì)指南確立為肺纖維化臨床前評(píng)價(jià)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
2023年3月，中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院陳永艷副教授團(tuán)隊(duì)在immunity & ageing期刊上發(fā)表了題為“ugrp1-modulated marco+ alveolar macrophages contribute toage-related lung fbrosis”的研究論文。本研究主要探討了老化的肺部容易受到慢性肺部疾病的影響，發(fā)現(xiàn)老化的呼吸道上皮細(xì)胞顯著上調(diào)子宮球蛋白相關(guān)蛋白1（ugrp1）的表達(dá)，從而導(dǎo)致衰老肺中ccl6水平升高，而肺泡巨噬細(xì)胞（am）隨著衰老而發(fā)生本質(zhì)變化，表現(xiàn)出細(xì)胞數(shù)量減少和基因表達(dá)改變；ugrp1和marco+am的上調(diào)參與了肺纖維化的進(jìn)展。因此ugrp1以ccl6依賴的方式調(diào)制與年齡相關(guān)的肺纖維化的marco+am，是為老齡化人群建立最佳靶向的關(guān)鍵。
圖 運(yùn)用羥脯氨酸含量檢測(cè)試劑盒abs580066對(duì)肺組織進(jìn)行檢測(cè)
羥脯氨酸含量檢測(cè)試劑盒：
試劑盒組分
規(guī)格
儲(chǔ)存條件
96-well microplate
1 plate
常溫
substrate
powder x 1
4℃，避光保存
substrate diluent
8 ml x 1
4℃，避光保存
stop solution
4 ml x 1
4℃
dye reagent
powder x 1
4℃，避光保存
dye reagent diluent
4 ml x 1
4℃
standard
powder x 1
4℃
plate adhesive strips
3 strips
常溫
另需自備的材料：酶標(biāo)儀（可讀取560nm處的吸光度）、蒸餾水、移液器與槍頭、研缽、離心機(jī)、高壓滅菌器、6mol/l hcl、10mol/l naoh、酒精等。
操作步驟（以組織樣本為例）：
1、樣本處理：稱取1g組織于玻璃管中，加入1ml 6mol/l hcl，放入110℃烘箱中6~12h，離心機(jī)16000g 25℃離心20min，取上清液至新離心管中 ，然后加10mol/l naoh調(diào)節(jié)ph至7.0。
2、試劑準(zhǔn)備：
1）substrate：加入8ml substrate diluent溶解。（現(xiàn)配現(xiàn)用）
2）dye reagent：加入4ml dye reagent diluent溶解。（現(xiàn)配現(xiàn)用）
3）標(biāo)準(zhǔn)品：加入1ml蒸餾水溶解standard得到standard①；從standard①取10μl加入990μl蒸餾水中得到standard②；取200μl standard②加入800μl蒸餾水中，制備得到濃度為200μmol/l的standard。
標(biāo)準(zhǔn)品二倍連續(xù)稀釋示例
3、上樣：
1）分別將40ul不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、樣品加入相應(yīng)孔中，另設(shè)置空白孔加入40ul蒸餾水；
2）每孔分別加入80ul substrate，混合均勻，室溫孵育20min；
3）每孔分別加入40ul stop solution，混合均勻，室溫孵育10min；
4）每孔分別加入40ul dye reagent，混合均勻，放入65℃烘箱中反應(yīng)20min，冷卻至室溫。
試劑
標(biāo)準(zhǔn)品孔
樣品孔
空白孔
標(biāo)準(zhǔn)品
40ul
--
--
樣品
--
40ul
--
蒸餾水
--
--
40ul
substrate
80ul
80ul
80ul
混合均勻，室溫孵育20min
stop solution
40ul
40ul
40ul
混合均勻，室溫孵育10min
dye reagent
40ul
40ul
40ul
混合均勻，放入65℃烘箱中反應(yīng)20min，冷卻至室溫
4、檢測(cè)與計(jì)算：使用酶標(biāo)儀測(cè)量560nm處的吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣本濃度
注意事項(xiàng)：
1）對(duì)于未知的樣品，建議多做幾個(gè)稀釋梯度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)；
2）試劑盒中的試劑需要現(xiàn)配現(xiàn)用，配好的溶液無(wú)法儲(chǔ)存，可能影響顯色讀數(shù)進(jìn)而影響檢測(cè)；如果樣本需要分批檢測(cè)，建議分批收樣儲(chǔ)存，待樣本收齊后統(tǒng)一檢測(cè)；
3）每次實(shí)驗(yàn)必須重新檢測(cè)并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
absin生化檢測(cè)試劑盒——氨基酸代謝系列：
貨號(hào)
品名
用途
abs580002
alanine transaminase microplate assay kit
谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alt）檢測(cè)
abs580004
aspartate transaminase microplate assay kit
谷草轉(zhuǎn)氨酶（ast）檢測(cè)
abs580005
glutamate microplate assay kit
谷氨酸（glu）檢測(cè)
abs580063
glutamate synthase microplate assay kit
谷氨酸合成酶（gogat）檢測(cè)
abs580064
glutaminase microplate assay kit
谷氨酰胺酶（gls）檢測(cè)
abs580066
hydroxyproline microplate assay kit
羥脯氨酸（hyp）檢測(cè)
abs580116
arginase microplate assay kit
精氨酸酶檢測(cè)
abs580184
lysine microplate assay kit
賴氨酸（lys）檢測(cè)
abs580118
proline microplate assay kit
脯氨酸（pro）檢測(cè)
abs580127
cysteine microplate assay kit
半胱氨酸（cys）檢測(cè)
abs580187
total amino acid microplate assay kit
氨基酸（aa）檢測(cè)
abs580157
acetolactate synthase microplate assay kit
乙酰乳酸合成酶/乙酰羥酸合酶（als）檢測(cè)
引用文獻(xiàn)
chen y, hao x, li m, tian z, cheng m. ugrp1-modulated marco+ alveolar macrophages contribute to age-related lung fibrosis. immun ageing. 2023 mar 18;20(1):14. doi: 10.1186/s12979-023-00338-8. pmid: 36934284; pmcid: pmc10024420.
好消息！absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)！
absin特色產(chǎn)品線：
wb相關(guān)：ecl發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；ihc相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；ip/coip試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑；血清、bsa、蛋白酶k、ctb、ttx、cee；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；elisa試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...