展開是薄層色譜法重要的步驟，展開劑與展開方式的選擇都會對實驗結(jié)果造成很大的影響。因此操作人員要根據(jù)實驗要求與實際情況選擇合適的展開劑與展開方式。
展開劑
展開劑的極性增大次序為：石油醚→環(huán)己烷→二硫化碳→四氯化碳→二氯乙烯→苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→四氫呋喃→乙酸乙酯→丙酮→丁酮→正丁醇→乙醇→甲醇→水→冰醋酸→吡啶→有機酸。
展開劑的選擇標(biāo)準(zhǔn)：選擇展開劑時要求展開劑對薄層吸附劑有一定親和力，能把被分離物從吸附劑表面解析下來，但又不能過強，否則被解析下來的物質(zhì)不易再吸附。當(dāng)單一溶劑不能滿足要求時，可用多元混合溶劑作展開劑。
展開方式
1.上行展開
點樣后的紙或薄層的底邊置于盛有展開劑的直立型的多種規(guī)格的平底或雙槽展開室中，展開劑由紙或薄層下端借毛細(xì)管作用上升至前沿。適合含粘合劑的硬板展開，是薄層色譜中常用的展開方式。
2.下行展開
將點樣后的濾紙懸放在展開劑槽中，用粗玻棒壓紙以固定，展開室底部可放飽和濾紙用的溶劑，展開劑從上而下流動，下行法中展開劑除毛細(xì)管作用外還有重力作用，因此展速比上行法相對較快，多用于紙色譜法。
3.雙向展開
一般操作是取一塊方形的薄板，在角上點樣，展開后取出晾干。將薄板轉(zhuǎn)90度，換另一種展開劑再次展開，可取得較好的分離效果。通常用于成分較多、性質(zhì)比較接近的難分離物質(zhì)的分離。
4.近水平展開
將適量展開劑傾入長方形的玻璃展開室中，將點樣后的薄層板下端浸入展開劑0.5cm，薄層上端墊高使薄層與水平成5°-10°的角度，這樣展開劑就由下而上進行展開。這種展開方法適用于不含粘合劑的軟板的展開。