不同組織rna提取原理是將細(xì)胞裂解，釋放出 rna，并通過(guò)不同方式去除蛋白，dna 等雜質(zhì)，最終獲得高純度 rna 產(chǎn)物的過(guò)程。常用的rna提取方法是trizol方法，trizol內(nèi)含異硫氰酸胍能迅速破碎細(xì)胞，同時(shí)使核蛋白復(fù)合體中的蛋白變性并釋放出核酸，由于釋放出的dna和rna在特定ph值下的溶解度不同，且分別位于中間相和水相，從而使dna和rna得到分離，取出水相后，通過(guò)有機(jī)溶劑 (氯仿) 抽提及異丙醇沉淀，可得到純凈rna。那么你知道rna提取的原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！
一、常見(jiàn)rna提取樣本細(xì)胞裂解方法
1.異硫氰酸胍/苯酚（trizol）
原理：苯酚裂解細(xì)胞，變性蛋白，但不能wan全抑制rnase活性。異硫氰酸胍迅速溶解蛋白，破碎細(xì)胞，解離核蛋白復(fù)合體，釋放核酸，并抑制rnase活性，保持rna完整性。苯酚是酸性酚，后續(xù)加入氯仿進(jìn)行有機(jī)萃取。
特點(diǎn)：得率高、可提取到含mirna和其他小rna在內(nèi)的總rna。但產(chǎn)生有機(jī)試劑廢物。
適用范圍：次級(jí)代謝較少的植物組織，如幼苗、幼葉等。培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織、微生物。
2.胍鹽/β-巰基乙醇法：
原理：胍鹽一般是鹽酸胍或異硫氰酸胍。鹽酸胍迅速裂解細(xì)胞，變性蛋白，并抑制核酸酶活性。配合β-巰基乙醇還原蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的二硫鍵，從而使rnase變性。
特點(diǎn)：得率高
適用范圍：次級(jí)代謝較少的植物組織，如幼苗、幼葉等。培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織、微生物。
二、常見(jiàn)抽提方法：
1.酚氯仿抽提（有機(jī)試劑抽提）
原理：將被裂解的生物樣本，混勻離心分相以后，rna在上層水相，dna，蛋白質(zhì)在中間層，下層有機(jī)相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀rna，漂洗后得到rna。
優(yōu)點(diǎn)：得率高、可提取到含mirna和其他小rna在內(nèi)的總rna。
缺點(diǎn)：用到苯酚、氯仿等有毒試劑。
2.硅膠柱法抽提
原理：硅基質(zhì)材料在一定的高鹽緩沖系統(tǒng)下高效、專(zhuān)一地吸附核酸。（高鹽低ph吸附核酸，低鹽高ph釋放核酸。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、安全無(wú)毒
缺點(diǎn)：需配合高速離心機(jī)使用；提取的總rna不含小于200nt的小rna。
3. 磁珠法抽提
原理：納米微球磁珠材料表面涂上一層二氧化硅，使磁珠獲得吸附能力。
優(yōu)點(diǎn)：磁場(chǎng)中快速分離，無(wú)需離心，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。
缺點(diǎn)：成本較高；提取的rna可能殘存磁珠。
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