熱啟動(dòng)直擴(kuò)型taq dna聚合酶說明書
產(chǎn)品詳情
本酶為taq-d dna聚合酶（klentaq1）的熱啟動(dòng)型，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活。taq-d dna聚合酶是大腸桿菌重組表達(dá)的嗜熱細(xì)菌thermus aquaticus來源的外切酶缺失型taq dna聚合酶（刪除了5’ 外切酶結(jié)構(gòu)域）。該酶具有5’→3’聚合酶活性，無5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3'-da尾巴。不可用于taqman探針法q-pcr。本酶經(jīng)基因工程改造，尤其適合于溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（snp）分型。擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度可達(dá)3 kb。延伸速度為1.0 kb/min（72℃）。
特點(diǎn)
本酶為熱啟動(dòng)聚合酶，可提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體；
熱穩(wěn)定性好：95℃下半衰期超過40 min；
模板dna耐受范圍廣；
pcr產(chǎn)物具有3’-da尾巴，可直接用于t/a克隆；
可以摻入dutp、ditp、熒光標(biāo)記核苷酸。
相比普通taq dna 聚合酶，本酶更加適合未處理的血液、組織、唾液等樣本的pcr；
濃度2.5u/μl活性定義
以大馬哈魚精子dna作為模板/引物，在72℃、30 min內(nèi)，將10 nmole脫氧核糖核苷酸摻入到酸不溶物中所需的酶量，定義為一個(gè)活性單位（u）。
酶貯存緩沖液
20 mm tris-hcl (ph 8.0), 100 mm kcl, 1 mm dtt, 0.1 mm edta, 0.5% nonidet p40, 0.5% tween 20, and 50% glycerol.
產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成
component
78dc10013-250u
78dc10013-250u×5
78dc10013-1250u×4 78dc10013-2500u×5
hs taq-d dna polymerase（klentaq1）
250u
250u×5
1250u×4
2500u×5
10×taq-d buffer
0.5 ml×1
0.5 ml×5
1.0 ml×10
1.0 ml×25
適用范圍
溶解曲線法單核苷酸多態(tài)性（snp）分型
dna熒光標(biāo)記
血液、組織樣本等直擴(kuò)pcr
應(yīng)用舉例
以下反應(yīng)舉例為50 μl標(biāo)準(zhǔn)pcr體系， 僅供參考。實(shí)際pcr條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件。
組份
體積/μl
終濃度
10×taq-d buffer
5
1×
dntps（2.0 mm）
5
0.2 mm
引物f（10 μm）
1.5
0.3 μm
引物r（10 μm）
1.5
0.3 μm
template
varable*
/
hs taq-d（2.5u/μl）
1.0
2.5u
ddh2o
varable
/
總體積
50
/
*dna template可參照如下標(biāo)準(zhǔn)（50 μl pcr體系）：
人類基因組dna
0.1 μg-1 μg
λdna
0.5 ng-5 ng
質(zhì)粒dna
0.01 ng-1 ng
大腸桿菌dna
10 ng-100 ng
pcr反應(yīng)條件
95℃
5 min
95℃
15 sec
55~72℃
20 sec
30 cycles
72℃
1 min/kb
72℃
5 min
注意事項(xiàng)
本酶為熱啟動(dòng)聚合酶，需95度加熱5分鐘或98度加熱2分鐘而激活；因此有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體，得到良好的pcr結(jié)果。
taq-d dna聚合酶具有脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，因此在pcr產(chǎn)物3’末端通常會(huì)加上1個(gè)多余的腺嘌呤。
堿基出錯(cuò)率是指在每個(gè)堿基合成過程中所摻入的錯(cuò)誤核苷酸數(shù)目。taq-d dna聚合酶的堿基錯(cuò)誤率為1×10-5。
對(duì)非熱啟動(dòng)酶而言，建議在冰上配置pcr 反應(yīng)液后，再放入pcr儀中進(jìn)行擴(kuò)增。這有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性擴(kuò)增，得到良好的pcr結(jié)果。
如進(jìn)行pcr擴(kuò)增后，除目的條帶外，還伴隨其他雜帶，建議適當(dāng)減少體系中的酶用量，以增加pcr擴(kuò)增反應(yīng)的特異性
本公司buffer經(jīng)大量pcr反應(yīng)實(shí)例優(yōu)化而成，然而對(duì)某些pcr反應(yīng)存在一個(gè)最you的鎂離子濃度。若需要優(yōu)化鎂離子濃度，請(qǐng)購買本公司不含鎂離子的buffer和mgcl2/mgso4。
本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。
質(zhì)量控制
相關(guān)測(cè)試表明無外源內(nèi)切酶或外切脫氧核糖核酸酶污染。pcr方法檢測(cè)無宿主殘余dna，能有效擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。
室溫放置一周，擴(kuò)增活性無明顯改變；但強(qiáng)烈建議不要在室溫下長(zhǎng)期放置，用畢放回-20度。
貨號(hào) 品名 規(guī)格 品牌
78dc10013-250u 熱啟動(dòng)直擴(kuò)型taq dna聚合酶 250u biohub
78dc10013-250u×5 熱啟動(dòng)直擴(kuò)型taq dna聚合酶 250u×5 biohub
78dc10013-1250u×4 熱啟動(dòng)直擴(kuò)型taq dna聚合酶 1250u×4 biohub
78dc10013-2500u×5 熱啟動(dòng)直擴(kuò)型taq dna聚合酶 2500u×5 biohub