制備型液相色譜儀目的是對產(chǎn)品的單體進行提取和純化,與蒸餾、萃取等純化方法相比制備型液相色譜法更有效,但對操作的要求也更高。為保證制備型液相色譜儀可以達到理想的實驗效果,需要謹慎選擇操作條件,減少影響分離效果的因素。
色譜柱的選擇
色譜柱的容量有一定限制,每種色譜柱都有自己的負載能力,因此樣品的導入值上限需要根據(jù)所用的色譜柱確定。色譜柱與大樣品量的關系如下:
1.色譜柱內(nèi)半徑越大,柱子的負載能力越高。
2.分配系數(shù)k增加,柱子的負載能力也會增加。同時,溶質(zhì)的保留體積同樣也會增加。
3.色譜柱的填充方法影響著填充密度,用良好方法填充的柱子密度趨近它的大值,柱子的樣品量和分辨率同樣也會趨近大值。
4.采用表面積大的吸附劑雖然會減弱色譜系統(tǒng)的速度和適用范圍,但可以增加柱子的負載能力。
5.柱子的負載能力還隨著柱子的長度增加而增長,但柱子過長會損失柱效。
6.填料顆粒的大小與柱子負載量也呈正相關關系。
樣品的溶解
樣品在溶劑里的溶解度會影響注入的大樣品量。在流動相里難溶解的物質(zhì)通常不能充分分離或分辨率比較低,因此需要先將樣品溶解在另一種溶劑中,再將這種溶液送人色譜分離系統(tǒng)。中間溶劑的選擇很重要,并且需要經(jīng)驗。
流動相的純度
流動相的純度與樣品中的純度息息相關。在分離組分特性相近或痕量組分時,流動相里的雜質(zhì)還可能污染色譜柱,影響分離效能。因此流動相須保證純凈。
流動相的流速
流動相的流速與分離速度、分離效率相關,流速越快分離速度越快,但分離效率越低,因此需要選擇合適的速度保證速度與效率并重。
固定相的選擇
為了分辨效果,應盡量選擇吸附色譜。從填料的容量看,全多孔型比表面多空型好;從固定相微粒的大小看,30~50μ較常用。