taq dna連接酶應(yīng)用范圍
taq dna 連接酶是一種熱穩(wěn)定性連接酶，能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補(bǔ)靶 dna 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端通過(guò)磷酸二酯鍵相連。taq dna 連接酶催化的連接反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 dna 完全配對(duì)，并且兩條寡核苷酸鏈之間沒(méi)有空隙的條件下才可發(fā)生。因此，可以用它來(lái)檢測(cè)單堿基替換。在 45℃-65℃ 范圍內(nèi)，taq dna 連接酶均有活性。
應(yīng)用
雙鏈dna切刻的修復(fù)
用于gibson組裝方法的建立
活性定義
1 單位指 50μl 反應(yīng)體系中，45℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 50% 的1μg 經(jīng) bsteii 消化的 λdna 片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。
儲(chǔ)存
-20℃可保存半年，長(zhǎng)期儲(chǔ)存請(qǐng)置于 -70℃。
1× taq dna 連接酶反應(yīng)緩沖液
20 mm tris-hcl（ph 7.6），25 mm kac，10 mm mg(ac)2，10 mm dtt，1 mm nad 和 0.1% triton x-100，45℃ 溫育。 該酶需 nad+ 作輔因子，在 10× taq dna 連接酶緩沖液中已添加 nad+；為了延長(zhǎng) nad+ 的半衰期，緩沖液應(yīng)于 -70℃ 貯存。
合成酶，能催化兩個(gè)分子連接成一個(gè)分子或把一個(gè)分子的尾相連接的酶。此反應(yīng)與atp的分解反應(yīng)相偶聯(lián)。在把兩分子相連接的同時(shí)發(fā)生三磷酸腺苷（atp)的高能磷酸鍵的斷裂如dna連接酶等。
連接酶是酶分類(lèi)中重要的一類(lèi)(ec 6):6.1形成c-o鍵；6.2形成c-s鍵；6.3形成c-n鍵；6.4 形成c-c鍵。
連接酶的催化反應(yīng)過(guò)程需要mg離子