陽離子聚合物--聚乙烯亞胺（polyethyleminine，pei)
聚乙烯亞胺是目前研究的陽離子聚合物非病毒基因載體，它是由單體(-ch,ch,-nh-)構(gòu)成的具有伯胺﹑仲胺和叔胺基團(tuán)的水溶性聚合物。pei單體中每3個(gè)原子含1個(gè)氮，并構(gòu)成同的胺基。這些胺基的pka值不同，使 pei在較寬的ph范圍均可以被質(zhì)子化,這是pei有較強(qiáng)的結(jié)合dna附細(xì)胞并作為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體的重要原因。
分子量是決定其轉(zhuǎn)染效率重要因素，高分子量的pei具有高效的基因轉(zhuǎn)染效率，但因?yàn)槠浯罅空姾傻拇嬖谝约胺巧锝到庑?，可以?dǎo)致細(xì)胞膜去穩(wěn)定化，顯示出較大的細(xì)胞毒性，低分子量的pei(低于2kda)毒性低，但基因轉(zhuǎn)染效率也隨之降低。在hela、cos7、293t和cho四種細(xì)胞上評價(jià)交聯(lián)pei作為基因載體體外轉(zhuǎn)染pgl3的效率。發(fā)現(xiàn)二硫鍵含量和pei分子量大小決定了轉(zhuǎn)染效率。
不同分子量的pei轉(zhuǎn)染效率不同
枝狀的 800 kd pei 是*報(bào)道的可用于多種細(xì)胞轉(zhuǎn)染的試劑，枝狀的 25 kd pei（25b）用hek293 細(xì)胞大規(guī)模瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，其轉(zhuǎn)染效率較枝狀2 kd、600 kd、800 kd 或線狀 22 kdpei（22l）的高。
有研究報(bào)道，比較了 3 種商品化的 pei 轉(zhuǎn)染試劑 25 kd lpei、40 kdpei-max、pei pro，轉(zhuǎn)染 hek293 和 cho 細(xì)胞，pei pro 的轉(zhuǎn)染效率低于 25 kd lpei、40 kd pei-max，pei pro 的毒性。經(jīng)過優(yōu)化，pei-max 的表達(dá)量優(yōu)于 25 kd lpei。
pei 介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中 dna 和 pei 比例一般為1:2 ~ 1:3（w/w），提高轉(zhuǎn)染試劑比例會(huì)提高轉(zhuǎn)染效率，但是隨之細(xì)胞毒性也會(huì)增加。另外轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞密度、dna-pei聚合物的大小、培養(yǎng)基的組成等都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。
陽離子聚合物--脂質(zhì)體
陽離子脂質(zhì)體易穿透細(xì)胞膜，轉(zhuǎn)染效率要明顯高于其他轉(zhuǎn)染試劑，因而也廣泛用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，但因其化學(xué)合成不易，商業(yè)化常用的脂質(zhì)體如 lipofectamine 價(jià)格較高，遠(yuǎn)貴于其他化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑，因此只適合于小量瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
目前的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染體系是將陽離子脂質(zhì)體與 dna 溶液混合，以形成 dna 夾在脂質(zhì)雙分子層之間的結(jié)構(gòu)。hek293 細(xì)胞是非常適合進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，很容易接收外來 dna，在合適的轉(zhuǎn)染條件下，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 80% 以上， 使用商品化羅氏的 fugene hd 或者invitrogen 的 lipofectamine2000 的轉(zhuǎn)染效率甚至可達(dá)90% 以上。但是傳統(tǒng)的 cho 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率相對較低，只有 40% ~ 60%。
thermo fisher 公司新開發(fā)的expi293f 和 expicho 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)量有了較大的提升，但是商品化的轉(zhuǎn)染試劑盒培養(yǎng)基價(jià)格較貴，不太適用于產(chǎn)業(yè)化放大。
因此，目前pei轉(zhuǎn)染試劑，價(jià)格實(shí)惠深受廣大科研伙伴的熱愛。重點(diǎn)是超級便宜！?。”阋说绞裁闯潭饶?？偷偷告訴你：據(jù)說一次可配1l的量！1l？？天啊，怎么能用的完？如此便宜實(shí)惠的轉(zhuǎn)染試劑該如何操作呢？
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