本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
牛（bovine）朊病毒（prion）
elisa檢測(cè)試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）。往預(yù)先包被朊病毒抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、hrp標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過(guò)溫育并徹-底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（od 值），與cutoff值相比較，從而判定標(biāo)本中朊病毒（prion）的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完-全溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)苯尤?0μl加樣即可。
4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱(chēng)
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
12孔×8條
12孔×4條
無(wú)
陰性對(duì)照
0.5ml
0.5ml
無(wú)
陽(yáng)性對(duì)照
0.5ml
0.5ml
無(wú)
樣本稀釋液
6ml
3ml
無(wú)
檢測(cè)抗原-hrp
10ml
5ml
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物a
6ml
3ml
無(wú)
底物b
6ml
3ml
無(wú)
終止液
6ml
3ml
無(wú)
封板膜
2張
2張
無(wú)
說(shuō)明書(shū)
1份
1份
無(wú)
自封袋
1個(gè)
1個(gè)
無(wú)
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μl；
3.待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μl，樣本稀釋液40μl；
4.隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（hrp）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的od值。
結(jié)果判斷
1. 試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔o(hù)d值平均值≥1.00；
陰性對(duì)照孔o(hù)d值平均值≤0.15。
2. 臨界值（cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷：樣品od值＜臨界值（cut off），樣品為陰性
4. 陽(yáng)性判斷：樣品od值＞臨界值（cut off），樣品為陽(yáng)性
試劑盒性能
1.準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔o(hù)d值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔o(hù)d值平均值≤0.15，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6個(gè)月
免責(zé)聲明
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
關(guān)鍵詞：洗板機(jī) 水浴鍋 酶標(biāo)儀 恒溫箱