基本知識
1. 液體培養(yǎng)基貯存于4 oc 冰箱,避免光照,實驗進行前放在37度水槽中溫熱。
2. 液體培養(yǎng)基(加血清) 存放期為六個月,期間glutamine 可能會分解,若細胞生長不佳,可以再添加適量glutamine。
配制參數(shù)
粉末培養(yǎng)基配制(以1 升為例):
1. 細胞培養(yǎng)基通常須添加10 % 血清,因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900 ml,ph 為 7.2 - 7.4。nahco3 為另外添加,若將nahco3 粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會造成 ph 之誤差,或局部過堿。因此粉末培養(yǎng)基及nahco3 粉末應(yīng)分別溶解后才混合,然后用co2 氣體調(diào)整ph,而非用強酸(hcl)或強堿(naoh),因為氯離子對細胞生長可能有影響,且貯存時培養(yǎng)基的ph 易發(fā)生改變。
2. 材料:
2.1. 純水(milli-q 水或二次至三次蒸餾水,水品質(zhì)非常重要)
2.2 粉末培養(yǎng)基
2.3 nahco3 (sigma s-4019)
2.4 電磁攪拌器
2.5 無菌血清瓶
2.6. 0.1 或0.2 mm無菌過濾膜
2.7. ph meter
2.8. 真空幫浦
2.9. co2 氣體