薄層色譜(thin layer chromatography，tlc)在藥物尤其在植物藥成分的定性和定量分析方面早已有了非常廣泛的應(yīng)用。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及新材料的應(yīng)用，使其得到了很大發(fā)展，出現(xiàn)了許多新技術(shù)，如薄層色譜、假相薄層色譜、反相薄層色譜、微乳薄層色譜在中藥藥物分析中已有一定的應(yīng)用。tlc在規(guī)范化、儀器化方面均取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，在大批量樣品及某些特殊樣品的快速分析中，顯示了分析容量大、可采用特征專(zhuān)屬的顯色劑以及極低的溶劑消耗等優(yōu)勢(shì)。
近年來(lái)tlc廣泛應(yīng)用于有機(jī)化合物的分析鑒定、植物藥有效部位的分離精制、有機(jī)合成、結(jié)構(gòu)分析、生物測(cè)定等，尤其在研究開(kāi)發(fā)植物藥有效部位和中成藥質(zhì)量控制中，是用于定性、定量分析的簡(jiǎn)便的科學(xué)方法。但tlc亦有其缺陷，其色譜結(jié)果易受鋪板質(zhì)量、點(diǎn)樣技術(shù)、展開(kāi)劑配制、層析環(huán)境中展開(kāi)劑的飽和度、環(huán)境溫濕度等因素的影響，有時(shí)難于重復(fù)；顯色又受均勻性、靈敏度、穩(wěn)定性等影響，這均使測(cè)定結(jié)果偏差較大。近幾年圍繞著測(cè)定過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化，薄層色譜技術(shù)有了全新的發(fā)展，擴(kuò)大了tlc技術(shù)在中藥藥物定性定量分析中的應(yīng)用。
中藥材的鑒別
用薄層色譜進(jìn)行指證性鑒別，它們之間的關(guān)系是共性與個(gè)性的關(guān)系。制備試藥生藥-共性化合物-共性特征(指示性的)薄層色譜個(gè)性化合物個(gè)性特征(rf值、顏色)薄層色譜為生藥提供了一個(gè)可信的“身份”，它可以提供分子水平上的鑒別作用，從而確定是不是認(rèn)定的生藥，是不是道地的生藥，是不是已失效的生藥。
中華人民共和國(guó)藥典2005版一部規(guī)定，人參和西洋參的鑒別必須使用薄層色譜法。取人參及西洋參粉末各19，制成供試品溶液；另取它們的對(duì)照藥材19，同法制成對(duì)照藥材試液，再取人參單體皂普rbl、re、rgl、rf和擬人參皂昔fll制成對(duì)照品溶液，于同一硅膠g薄層板上進(jìn)行色譜層析，規(guī)定供試品譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，在日光及紫外光(365nm)下，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。在這里我們可以看到，人參分子特征是人參皂營(yíng)單體，其偽品異類(lèi)不具備這種分子個(gè)性特征，而且同屬不同種的人參和西洋參分子特征亦不同，人參特含皂普rf，而西洋參則特含擬人參皂昔fll。這在某種程度上給我們規(guī)定了人參特征譜系。這種分子的不同、譜系的不同，就區(qū)別了藥材的異同。
在中成藥及其復(fù)方制劑方面，趙志軍等建立了*的t lc 鑒別方法，對(duì)方中組成藥物人參、黃芪、何首烏、丹參及甲基*進(jìn)行鑒別。結(jié)果，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，專(zhuān)屬性強(qiáng)，陽(yáng)性對(duì)照無(wú)干擾。金陽(yáng)研究破壁*的tlc 鑒別方法，通過(guò)對(duì)集中提取及展開(kāi)系統(tǒng)的比較，對(duì)破壁靈芝孢子粉的鑒別選擇gf254 板，用石油醚(60℃~ 90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上層溶液為展開(kāi)劑。結(jié)果，鑒別效果好，能很好地把破壁靈芝孢子粉和靈芝區(qū)別開(kāi)來(lái)。
植物藥成分的鑒別
tlc 法在植物藥成分鑒別方面的應(yīng)用已極為廣泛。印度m.s.大學(xué)的murthy 等在2008 年報(bào)道了關(guān)于莕菜屬植物中樺木酸的tlc檢測(cè)方法，該方法將2.5g根粗粉用25ml甲醇溶液水浴加熱回流提取30min，同法提取4 次后合并提取液，濾過(guò)、離心后制成一定濃度的甲醇溶液。將該樣品溶液與樺木酸甲醇對(duì)照液同時(shí)在tlc硅膠g60 f254預(yù)制板上點(diǎn)樣，用環(huán)己烷2醋酸乙酯2冰醋酸(7∶3∶0.03)溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，30min后取出吹干，用茴香醛2硫酸溶劑噴淋，110℃加熱3 min顯色，斑點(diǎn)在紫外2可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果顯示分離效果良好，rf=0.60。該方法在樺木酸的檢測(cè)方面以快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)優(yōu)于其他方法。
新德里生物技術(shù)研究所的ram等在對(duì)多種藥用植物的研究中建立了一種甲羥戊酸的快速tlc檢測(cè)方法,實(shí)驗(yàn)對(duì)象包括黃花蒿、補(bǔ)骨脂、長(zhǎng)春花、催眠睡茄、黃葉假杜鵑等藥用植物的葉，方法采用硅膠g60 f254預(yù)制板，展開(kāi)系統(tǒng)選用苯2丙酮(3:2)，先將薄層板在甲醇中浸泡1h去除雜質(zhì)，干燥后備用。粉碎的植物葉片用色譜純醋酸乙酯提取，與對(duì)照品醋酸乙酯溶液同時(shí)點(diǎn)樣展開(kāi)，室溫30℃，相對(duì)濕度55%，衍生試劑為0.05ml/ml茴香醛醋酸溶液-乙醇-97%硫酸(10:85:5)，110℃下加熱5 min顯色。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高。布達(dá)佩斯的ligor等研究了多種茶葉中活性物質(zhì)黃酮類(lèi)的tlc檢測(cè)方法,提出將經(jīng)典液相萃取提取方法(le)和超臨界液體萃取法(sfe)作比較，并用tlc法檢測(cè)在不同提取方法下活性成分的量。
化學(xué)藥品及復(fù)方制劑
近年來(lái)tlc法以其快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，在化學(xué)藥物成分的研究中仍有很多應(yīng)用。波蘭j agiellonian大學(xué)的starek等利用tlc法對(duì)抗炎藥*的多種劑型及其降解產(chǎn)物進(jìn)行了研究測(cè)定，其中，膠囊和注射劑用丙酮溶解，片劑在0.5mol/l的鹽酸溶液中水浴加熱至60℃，再制成丙酮溶液。該方法的展開(kāi)系統(tǒng)為醋酸乙酯-甲苯-氨基丁烷(2:2:1)，紫外吸收法測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)360nm。研究結(jié)果表明，*的穩(wěn)定性良好，不易降解，且在堿性環(huán)境下比酸性環(huán)境更穩(wěn)定，其降解產(chǎn)物為嘧啶-2-胺和2-甲基-2,3-二氫-4h-1 ,2-苯并噻唑-1 ,1 ,4-三酮。該方法穩(wěn)定可靠，快速準(zhǔn)確，可用于該類(lèi)藥物的分析鑒定。
波蘭jagiellonian大學(xué)的ekiert等用tlc測(cè)定唑類(lèi)抗真菌劑，這是抗真菌唑類(lèi)藥物成分檢測(cè)的新方法，目前鮮有報(bào)道。該實(shí)驗(yàn)對(duì)*、*、*和*4種抗真菌劑進(jìn)行了測(cè)定，前3種用甲醇溶解定量，*用氯仿溶解，并制成甲醇溶液。經(jīng)選擇tlc板用硅膠60f254熒光板，展開(kāi)系統(tǒng)選用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸(42:40:15:2:1)，uv檢測(cè)波長(zhǎng)260nm。該法準(zhǔn)確簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性強(qiáng)，可作為抗菌素類(lèi)藥物tlc法研究的參考。
藥品的親脂性是指某分子或分子的一部分對(duì)類(lèi)脂環(huán)境的親和性，有機(jī)化合物的親脂性可以影響它們的吸收、分布、代謝和排泄等，所以藥品的親脂性研究對(duì)于藥品的生物利用度的預(yù)測(cè)有著重要意義。傳統(tǒng)的親脂性研究是用液-液分配的方法測(cè)定，比較費(fèi)時(shí)繁瑣，反相tlc法親脂性研究方法的引入解決了這一問(wèn)題。
hamryt等用rp2tlc方法研究了12個(gè)精神類(lèi)藥物的親脂性。選用merck c18硅膠f254hptlc薄層板(10cm×10cm)，考察了多種流動(dòng)相組合，結(jié)果表明好的流動(dòng)相為：甲醇-水-0.01mol/lsds-10%醋酸鹽緩沖液(ph4.75)、醇-水-1%氨水、乙腈-水-1%氨水和二氧六環(huán)-水-1%氨水；而cserely等用相對(duì)于反相tlc板便宜的石蠟油涂層的硅膠板研究了12種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ace)的親脂性，其薄層板的制備方法為：tlc硅膠板用10%石蠟的正己烷溶液連續(xù)展開(kāi)18h，以石蠟油飽和tlc硅膠顆粒涂層，板經(jīng)干燥后在48 h內(nèi)使用，流動(dòng)相則選擇不同比例的乙腈-水-氫氧化銨溶液，用樣品的rf值計(jì)算相應(yīng)的親脂性。
藥品雜質(zhì)檢驗(yàn)
有關(guān)物質(zhì)檢查通常采用色譜法，可根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的性質(zhì)選用專(zhuān)屬性好，靈敏度高的薄層色譜，液相色譜(hplc)及氣相色譜(gc)法。薄層色譜法設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，但因影響重現(xiàn)性和精密度的因素較多，可用作一般有關(guān)物質(zhì)檢查。采用反相薄層色譜法，建立了阿德福韋酷有關(guān)物質(zhì)檢查法。以反相f254薄層板(hptlc rp18 f254)為吸附劑，以甲醇一水(3:1)為展開(kāi)劑，在紫外光燈254nm下檢視，阿德福韋醋與其有關(guān)物質(zhì)的分離狀況良好，檢測(cè)靈敏度高，小檢測(cè)限為0.1微克。采用薄層色譜法，建立了*中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，以硅膠g板為吸附劑，以氯仿-甲醇-丙酮-冰醋酸(9:0.5:0.5:0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，噴以30%硫酸乙醇液，在100℃加熱至斑點(diǎn)清晰。結(jié)果3種有關(guān)物質(zhì)與原藥*分離，rf值適中，低檢出量為0.2pg，且重復(fù)性好。采用薄層色譜法檢查復(fù)方*顆粒中的有關(guān)物質(zhì)(對(duì)氯苯乙酞胺)，使用0.5%梭甲基纖維素鈉(cmc)gf254硅膠板，以氯仿-丙酮-甲苯(13:5:2)為展開(kāi)劑，紫外光燈254nm下檢視，結(jié)果檢出對(duì)氯苯乙酞胺雜質(zhì)斑點(diǎn)與其它主藥成分斑點(diǎn)分離良好，空白樣品溶液的斑點(diǎn)對(duì)雜質(zhì)斑點(diǎn)無(wú)干擾，重現(xiàn)性好，f值適中，能有效檢出有關(guān)物質(zhì)。
中藥指紋圖譜分析
中藥指紋圖譜可有效反映中藥成分的復(fù)雜性，表征中藥質(zhì)量。其作為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一個(gè)方面，廣泛用于鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地，有效成分研究等方面]。色譜法是中藥指紋圖譜的主流，主要有g(shù)c、hplc、tlc等。tlc因其便宜、快速、開(kāi)放性、靈活性等優(yōu)點(diǎn)，用于中藥指紋圖譜分析。tlc的一大優(yōu)勢(shì)是提供直觀形象的可見(jiàn)光或熒光圖像，特征圖像直觀，專(zhuān)屬性好，判斷速度快，非常適合基層日常分析與現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)使用。廣藿香主要含萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、醇、酸、銅、醛類(lèi)等化合物，廣藿香不同提取部位具有不同的藥物效應(yīng)。袁旭江等研究不同產(chǎn)地廣藿香藥材薄層色譜指紋圖譜的差別，取不同產(chǎn)地廣藿香樣品6個(gè)，采用tlc檢測(cè)其化學(xué)成分。結(jié)果，不同產(chǎn)地廣藿香揮發(fā)油部位中成分薄層色譜行為相似，不同產(chǎn)地廣藿香甲醇提取部位與石油醚提取部位成分則存在明顯差異。薄層掃描儀具有原位掃描功能，通過(guò)測(cè)量薄層色譜rf值，原位紫外-可見(jiàn)吸收光譜，結(jié)合板上化學(xué)特征反應(yīng)形成薄層掃描中藥指紋圖譜。崔淑芬等使用薄層掃描法測(cè)定不同品種和產(chǎn)地的甘草并建立了指紋圖譜，可快速判斷藥材品質(zhì)，有效控制甘草質(zhì)量。
小結(jié)
傳統(tǒng)tlc技術(shù)由于精密度和重現(xiàn)性均較差，曾一度被其他快速發(fā)展起來(lái)的分離分析技術(shù)所取代，然而20 世紀(jì)80年代以來(lái)，隨著薄層在色譜板、點(diǎn)樣技術(shù)、展開(kāi)技術(shù)方面的發(fā)展，薄層色譜的規(guī)范化和儀器化程度大大提高。加之直觀、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，將在中藥多樣品的分析中發(fā)揮更大的作用。