內(nèi)毒素致病性pfeiffer于十九世紀(jì)首先提出“內(nèi)毒素”一詞，研究表明，內(nèi)毒素在機體內(nèi)作用于單核巨噬細胞產(chǎn)生多種細胞因子（腫瘤壞死因子tnf，白細胞介素il，干擾素interferon，凝血素等）。當(dāng)這些因子在機體內(nèi)過量時，則可導(dǎo)致機體出現(xiàn)發(fā)熱、低血壓、休克、多器官功能衰竭甚至死亡。
因此，人和動物的注射藥物、生物制品和醫(yī)療器械的終端產(chǎn)品中的內(nèi)毒素的檢測和去除顯得尤為重要。
內(nèi)毒素結(jié)構(gòu)內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁的一部分，其主要成分為脂多糖（lps），經(jīng)細菌細胞裂解后釋放出來。lps可以分為三個不同的結(jié)構(gòu)域：特異性o鏈、核心寡聚糖和類脂a，如下圖所示：
內(nèi)毒素特性性質(zhì)穩(wěn)定：160℃的溫度下加熱2-4個小時，或用強堿、強酸或強氧化劑加熱煮沸30分鐘才能破壞它的生物活性。經(jīng)*處理后，可降低其毒性，但不能成為類毒素。中國藥典（cp）規(guī)定，藥品、生物制品的細菌內(nèi)毒素限值（l）一般按以下公式確定：
l=k/m
式中l(wèi)為供試品的細菌內(nèi)毒素限值，以eu/ml、eu/mg或eu/u（活性單位）表示；
k為人每公斤體重每小時大可接受的內(nèi)毒素劑量，以eu/(kg• h)表示，注射劑k=5 eu/(kg• h)，放射性藥品注射劑k=2.5 eu/(kg• h)，鞘內(nèi)用注射劑k=0.2 eu/(kg• h)；
m為人用每公斤體重每小時大劑量，以ml (kg• h)、mg(kg• h)或u/(kg• h)表示，人均體重按60 kg計算，人體表面積按1.62 m2計算，注射時間若不足1小時，按1小時計算。
按人用劑量計算限值時，如遇特殊情況，可根據(jù)生產(chǎn)和臨床用藥實際情況做必要調(diào)整，但需說明理由。
美國藥典（usp）規(guī)定，非經(jīng)腸道藥品的內(nèi)毒素限值，以劑量定義，等于：k/m。
除了鞘內(nèi)給藥以外的任何給藥途徑，k均為5 usp-eu/kg，鞘內(nèi)給藥時，k為0.2 usp-eu/kg，對于非鞘內(nèi)給藥放射性藥品，內(nèi)毒素限值的計算為175/v，v為以ml為單位的大*劑量，對于鞘內(nèi)給藥的放射性藥品，其內(nèi)毒素限值為14/v，對于按以每平方體表面積計算的給藥劑量（通常是抗腫瘤藥品），計算公式為k/m，其中k=5 eu/kg，m為(大劑量/m2/小時×1.80m2)/70kg。
檢測方法的建立：1968年，由leivin和bang發(fā)現(xiàn)并建立了利用鱟試劑檢測細菌內(nèi)毒素的方法。他們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)遇到內(nèi)毒素時，鱟的血液能夠凝結(jié)成塊。用鱟血液中的變形細胞提取物與待檢樣品混合，如果待檢樣品中含有內(nèi)毒素，則會觀察到上述情況。鱟試驗法（lt）已經(jīng)替代了熱原檢查家兔法檢驗藥品中的內(nèi)毒素。
目前fda已經(jīng)批準(zhǔn)了以下lal檢測法：凝膠法（toxinsensortm凝膠法內(nèi)毒素檢測試劑盒）、濁度法和顯色法（toxinsensortm顯色法lal內(nèi)毒素檢測試劑盒）。
半定量測定——凝膠法
通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來半定量內(nèi)毒素的方法，是各國藥典細菌內(nèi)毒素檢查的方法。
定量測定——濁度法和顯色法
濁度法（動態(tài)濁度法和終點濁度法）是通過鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化來測定內(nèi)毒素含量的方法。終點濁度法是基于細菌內(nèi)毒素濃度和反應(yīng)混合物的終點濁度( 吸收度或透光率) 之間的定量關(guān)系的一種檢測方法；動態(tài)濁度法（又稱動態(tài)比濁法）是檢測反應(yīng)混合物的濁度上升某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間，或是檢測濁度增加速度的方法。
顯色法（動態(tài)顯色法和終點顯色法）是將鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)，可使特定底物顯色，通過釋放出的呈色團的多少來測定內(nèi)毒素含量，又稱為比色法。終點顯色法是依據(jù)反應(yīng)混合物中內(nèi)毒素濃度和其在孵育終止時釋放出的呈色團的量之間存在的量化關(guān)系來測定內(nèi)毒素含量的方法。動態(tài)顯色法是檢測反應(yīng)混合物的色度達到某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間, 或檢測色度增長速度的方法。
內(nèi)毒素檢測方法的選擇：
凝膠法——僅需檢測樣品的內(nèi)毒素*。此法操作比較簡單、經(jīng)濟，不需要測定設(shè)備，可進行定性或半定量測定。
顯色法（或濁度法）——定量測定樣品中內(nèi)毒素含量。
日常檢測量不大時，可以選擇終點顯色法，用普通的分光光度計就可完成實驗。檢測的樣品是生物制品、疫苗、血液制品等選用終點顯色法或動態(tài)顯色法。檢測量比較大，檢測的樣品對鱟試劑的干擾不大，可選用動態(tài)濁度法鱟試劑。注：動態(tài)濁度法與動態(tài)顯色法需要帶溫育系統(tǒng)的動態(tài)光度測定儀器及配套軟件。
華雅思創(chuàng)生物提供定量和定性產(chǎn)品如下：
凝膠定性：
lonza 凝膠法鱟試劑檢測法：
品牌 產(chǎn)品描述 貨號 靈敏度eu/ml 包裝
lonza pyrogenttmplus凝膠法鱟試劑檢測（含對照），單管內(nèi)毒素對照品1x1ml24次，單管 n289-06 0.06 24次
n289-125 0.125
n289-25 0.25
lonza pyrogenttmultra凝膠法鱟試劑檢測（含對照） 內(nèi)毒素對照品5x5ml 200次=4x50次/管 n594-03 0.03 200次
n594-06 0.06
n594-125 0.125
顯色法或濁度定量法：
品牌 貨號 產(chǎn)品描述 靈敏度eu/ml 包裝
lonza n383 pyrogenttm -5000動態(tài)濁度法檢測 0.01-100 100次
lonza n384 200次
lonza 50-650u kinetic-qcltm 動態(tài)顯色法鱟試劑檢測 0.005-50 192次
lonza 50-640 pyrogenetm 重組因子c熒光法內(nèi)毒素檢測試劑 0.005-5 192
輔助試劑耗材：
品牌 貨號 產(chǎn)品描述 包裝
lonza n186 凝膠法內(nèi)毒素對照品（e.coli strain 055：b5) 5瓶
lonza e50-640 終點顯色法內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對照品（strain 0111：b4) 1瓶
lonza w50-640 無內(nèi)毒素水，靈敏度＜0.005 eu/ml 30ml
lonza w50-100 100ml
lonza w50-500 500ml
lonza n207 13x100mm無內(nèi)毒素玻璃稀釋管，箔紙包裝，無瓶蓋 50/包
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