豬細(xì)小病毒(ppv)檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)法
本試劑盒僅供研究使用。 96t
使 用 目 的 ：
本試劑盒用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體中細(xì)小病毒（ppv）表達(dá)。
實(shí) 驗(yàn) 原 理 ：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（elisa）測(cè)定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（ppv） 。用純
化的豬細(xì)小病毒（ppv）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中細(xì)小病毒（ppv）抗
原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 hrp 標(biāo)記的細(xì)小病毒（ppv）抗體
結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 tmb 顯色。tmb 在 hrp
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測(cè)
定吸光度（od 值） ，與 cutoff 值相比較，從而判定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（ppv）的存在與
否。
豬細(xì)小病毒(ppv)檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)法試 劑 盒 組 成 ：
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1/瓶 8 陽性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 a 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 b 液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 個(gè)
豬細(xì)小病毒(ppv)檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)法標(biāo) 本 要 求 ：
1．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)
2．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月，
但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．不能檢測(cè)含 nan3 的樣品，因 nan3 抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
豬細(xì)小病毒(ppv)檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)法操 作 步 驟 ：
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50µl。然后在待測(cè)
樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，
盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 a 50µl，再加入顯色劑 b 50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度（od 值） 。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
豬細(xì)小病毒(ppv)檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)法結(jié) 果 判 定 ：
試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15
臨界值（cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 od 值< 臨界值（cut off）者為細(xì)小病毒（ppv）陰性
陽性判定：樣品 od 值≥ 臨界值（cut off）者為細(xì)小病毒（ppv）陽性
注 意 事 項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測(cè)時(shí)，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2m 的硫酸，使用時(shí)必須
注意安全。
保 存 條 件 及 有 效 期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6 個(gè)月